MTA1在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的:通過檢測腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(MTA1)在肝癌組織及不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細(xì)胞株中表達(dá)的差異,探討MTA1表達(dá)與肝細(xì)胞癌侵襲、轉(zhuǎn)移及生物學(xué)行為的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.MTA1在肝癌組織中的表達(dá)及與nm23、c-myc相關(guān)性的研究:實(shí)驗(yàn)所選取的石蠟包埋肝細(xì)胞肝癌組織標(biāo)本及新鮮肝細(xì)胞肝癌組織標(biāo)本均來自山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院。病例收集的原則:①所選病例的臨床資料齊全;②所選病例術(shù)前未經(jīng)任何抗腫瘤治療;③所選病例均經(jīng)

2、病理證實(shí)為肝細(xì)胞肝癌。30例石蠟包埋肝癌組織標(biāo)本選自該院2007年1月至2008年12月經(jīng)手術(shù)切除的存檔蠟塊,每例蠟塊均含有癌組織及相應(yīng)癌旁組織,將所選石蠟包埋肝癌組織標(biāo)本制成4～5μm厚的連續(xù)切片,用于免疫組化檢測。30例新鮮肝癌組織標(biāo)本選自該院2009年1～5月經(jīng)手術(shù)切除的病例,分別在新鮮肝癌癌灶中心無出血壞死部位及距癌灶邊緣3～5cm相應(yīng)癌旁組織處取材,部分置于-80℃冰箱凍存?zhèn)溆?用于RNA提取;另一部分用10％福爾馬林固定24

3、小時(shí),常規(guī)石蠟包埋,制成4～5μm厚的連續(xù)切片,用于免疫組化檢測。分別采用免疫組織化學(xué)法、半定量RT-PCR檢測肝癌組織及其相應(yīng)癌旁組織中MTA1蛋白、mRNA的表達(dá),分析其表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系,并分析MTA1蛋白表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因nm23-H1表達(dá)蛋白及癌基因c-myc表達(dá)蛋白的相關(guān)性。
　　 2.MTA1與肝癌細(xì)胞系侵襲轉(zhuǎn)移潛能關(guān)系的研究:實(shí)驗(yàn)所用的不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能人肝癌細(xì)胞株為人正常肝細(xì)胞株L02,人肝癌細(xì)胞株

4、MHCC97-H、SMMC7721、HepG2。分別采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR、Western blot檢測人正常肝細(xì)胞株L02,人肝癌細(xì)胞株MHCC97-H、SMMC7721、HepG2中MTAlmRNA及蛋白的表達(dá);采用Transwell小室體外細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測各細(xì)胞株的侵襲轉(zhuǎn)移潛能。
　　 結(jié)果:
　　 1.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,MTA1蛋白主要在細(xì)胞核中表達(dá),呈棕黃色顆粒狀,MTA1蛋白在肝癌癌組織中陽性表達(dá)率為6

5、5.0％(39/60),明顯高于其在癌旁組織中的表達(dá)(30.0％,18/60),二者的差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MTA1蛋白在肝癌組織中的表達(dá)與腫瘤分化程度、有無肝內(nèi)、外轉(zhuǎn)移或門靜脈癌栓相關(guān)。
　　 2.半定量RT-PCR結(jié)果顯示,MTA1 mRNA在肝癌組織中的平均相對表達(dá)量為(0.406±0.037),顯著高于其在相應(yīng)癌旁組織中平均相對表達(dá)量(0.189±0.021),兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MTA1mRNA在肝癌組織中的表達(dá)

6、與腫瘤分化程度、有無肝內(nèi)、外轉(zhuǎn)移或門靜脈癌栓相關(guān),與免疫組化的結(jié)論一致。
　　 3.Spearman相關(guān)分析顯示MTA1蛋白與nm23蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān),與c-myc蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)。
　　 4.實(shí)時(shí)定量RT-PCR結(jié)果顯示,以人正常肝細(xì)胞株L02為對照,MTA1 mRNA在細(xì)胞株SMMC7721、MHCC97-H、HepG2的相對表達(dá)量分別為0.336,0.665,0.250。單因素方差分析表明各細(xì)胞株中MTA1 m

7、RNA表達(dá),以MHCC97-H最高,SMMC7721次之,其次為HepG2,L02最低,且兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5.Western blot凝膠圖像分析結(jié)果顯示,MTA1蛋白在細(xì)胞株L02、SMMC7721、MHCC97-H、HepG2的相對表達(dá)量分別為0.050,0.392,0.615,0.237,單因素方差分析表明各細(xì)胞株中MTA1蛋白表達(dá),以MHCC97-H最高,SMMC7721次之,其次為HepG2,L02最

8、低,且兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 6.Transwell小室體外細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,細(xì)胞株MHCC97-H、SMMC7721、HepG2、L02的平均穿膜細(xì)胞數(shù)分別為(14.17±1.18)個(gè)/高倍鏡視野,(8.83±0.53)個(gè)/高倍鏡視野,(3.26±1.04)個(gè)/高倍鏡視野,(0.00)個(gè)/高倍鏡視野,兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1.肝細(xì)胞肝癌組織中MTA1 mRNA和蛋白的表達(dá)

9、均顯著高于其在相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá),且MTA1 mRNA和蛋白在肝癌組織中的表達(dá)與腫瘤分化程度、肝內(nèi)、外轉(zhuǎn)移及門靜脈癌栓相關(guān),MTA1蛋白與腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因nm23的表達(dá)呈負(fù)相關(guān),與癌基因c-myc蛋白的表達(dá)呈正相關(guān),提示MTA1可能在肝細(xì)胞肝癌的侵襲、轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用,三者的聯(lián)合檢測可更準(zhǔn)確的判斷肝癌的生物學(xué)行為,有助于肝癌的基礎(chǔ)研究和臨床治療。
　　 2.不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株中MTA1 mRNA和蛋白的表達(dá)均以MHC