白藜蘆醇對Pristane誘導兒狼瘡鼠B淋巴細胞作用及其機制研究.pdf

1、研究背景:
　　 系統(tǒng)性紅斑狼瘡是典型的自身免疫性疾病，以T、B細胞的高反應性、自身抗體的出現(xiàn)、免疫復合物的沉積和多系統(tǒng)器官組織的損害為特征，目前尚無完全令人滿意的治療SLE的藥物。以往認為T淋巴細胞異?；罨癁镾LE的主要發(fā)病機制，而今B淋巴細胞在SLE中的地位變得越來越重要?；蚯贸骃irt1-/-能出現(xiàn)系統(tǒng)性紅斑狼瘡樣表現(xiàn)，提示SIRT1有望成為SLE預防和治療的靶點。而白藜蘆醇(Resveratrol，Resv)為SIR

2、T1的激動劑，且具有調(diào)節(jié)免疫反應的作用。本課題組的前期研究結(jié)果顯示，Resv對Pristane誘導小鼠發(fā)生狼瘡具有預防作用，并能抑制狼瘡鼠脾臟CD4+T淋巴細胞的活化、增殖、誘導其凋亡。而目前尚無Resv對SLE及狼瘡模型B淋巴細胞作用的相關(guān)報道。
　　 研究目的:
　　 體內(nèi)觀察Resv對狼瘡鼠模型B淋巴細胞的影響;體外研究Resv對狼瘡鼠B淋巴細胞活化、增殖、凋亡、分化和功能的影響，并探討其可能機制，為Resv應用于

3、治療SLE的前景提供新的依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.將BALB/e鼠隨機分成正常對照組、模型對照組、Resv組三組，每組10只，觀察期為7月。應用ELISA法檢測血清Ig各亞型和自身抗體，免疫熒光法檢測免疫球蛋白IgG、IgM的沉積。
　　 2.分離Pristane誘導狼瘡鼠脾臟單個核細胞(SMC)，磁珠分選法分離CD19+B淋巴細胞，SMC或B細胞用不同濃度Resv干預后，用流式細胞術(shù)分析其CD69、CD8

4、0、CD86的表達;B細胞CFSE染色后用不同濃度Resv干預后，流式細胞術(shù)分析其增殖情況;B細胞用不同濃度Resv干預后，流式細胞術(shù)分析細胞凋亡;SMC或B細胞用不同濃度Resv干預后，用流式細胞術(shù)分析其分化情況，應用Real-time PCR檢測Blimp-1基因mRNA的表達;SMC或B細胞用不同濃度Resv干預后，應用ELISA檢測培養(yǎng)上清中的Ig各亞型的相對濃度，應用CBA法檢測上清中細胞因子水平。
　　 結(jié)果:

5、>　　 1.正常對照組與Resv組IgG在腎臟的沉積均明顯弱于模型對照組;正常對照組IgM的沉積明顯低于模型對照組，Resv組IgM的沉積存在減弱的趨勢;正常對照組血清IgG1、IgG2a、IgG3、IgM、IgA明顯低于模型對照組;Resv組血清IgG1、IgG2a、IgG3明顯低于模型對照組;正常對照組血清ANA、抗ds-DNA抗體、抗ss-DNA抗體明顯低于模型對照組;抗nRNP/Sm抗體模型對照組與正常對照組相比存在升高的趨勢

6、;Resv組血清ANA、抗ds-DNA抗體、抗RNP/Sm抗體雖比模型對照組下降，但并無統(tǒng)計學意義。
　　 2.Resv體外可抑制由LPS或抗CD40抗體引起的B細胞CD69、CD80、CD86的表達，且呈劑量依賴性;Resv可抑制由LPS引起的B細胞的增殖，且呈劑量依賴性;而Resv對B細胞的凋亡無影響;Resv可抑制由LPS或抗CD40抗體引起的SMC或B細胞CD138+漿細胞的分化，且呈劑量依賴性;Resv可使B細胞Bli

7、mp-1 mRNA表達水平顯著下降;Resv可抑制B細胞的IgG1、IgG2a、IgG3、IgM、IgA的分泌，且呈現(xiàn)劑量依賴性;Resvl0μM能促進B細胞IL-10的分泌;而Resv40μM抑制IL-10的分泌;Resv可抑制IL-6的分泌;Resv可使培養(yǎng)上清的IFN-γ/IL-4比例顯著下降。
　　 結(jié)論:
　　 pristane誘導狼瘡鼠存在B淋巴細胞的高反應性;白藜蘆醇體內(nèi)體外均可調(diào)控B淋巴細胞的功能;白藜蘆