肝硬化患者血CD14表達及臨床意義.pdf

1、該實驗旨在研究病毒性肝炎引起的肝硬化患者的外周血中PBMC對內毒素的反應,通過分離得到PBMC,用內毒素刺激,測定第3h和第6h的sCD14和TNF-α水平,同時檢測mCD14的表達,研究其動態(tài)變化,以模擬機體CD14的變化過程.材料與方法:選擇2001-2002年患有病毒性肝炎后肝硬化(符合2001年全國傳染病及寄生蟲學術會議修訂的病毒性肝炎防治方案及診斷標準)的住院病人59例,其中男性43例,女性16例,伴有內毒素血癥者29例,無內

2、毒素血癥者30例.健康對照組19例,男性11例,女性8例.所有病人及健康對照者均于抽血前禁食8-10小時,凌晨6 am抽取外周靜脈血8-10ml,注入去內毒素試管中(去內毒素肝素抗凝),并取其上清液0.5ml于專用試管中,于4℃冰箱保存?zhèn)溆?測定內毒素含量).采用梯度離心法,用淋巴細胞分離液(d=1.077),分離得到PBMC.加入含10﹪FCS的PRMI 1640(2mmol/L谷氨酰胺,100IU/ml青霉素,100mg/ml鏈霉素

3、),并記數(shù)細胞、檢測細胞活力(應>95﹪);并將細胞配成濃度為2×10<'6>/ml的細胞懸液備用.用內毒素刺激PBMC,其標準為每2×10<'6>(細胞數(shù))加入1ng的內毒素,然后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng).培養(yǎng)條件:37℃,5﹪CO<,2>.于第3 h、6 h取上清液,于-70℃冰箱保存待測.mCD14的檢測方法采用抗mCD14單克隆抗體(FITC標記)標記PBMC,用流式細胞儀記錄陽性細胞百分率和平均熒光強度.采用ELISA方法檢測上清液中