人體食管組織中終隔細胞的形態(tài)學及相關(guān)研究.pdf

1、終隔細胞(Telocytes，TCs)是一種新型的間質(zhì)細胞，典型的終隔細胞胞體較小，有著極長的胞質(zhì)突起，稱為端支(telopodes，Tps)。研究發(fā)現(xiàn)哺乳類的多種器官和組織中均存在這類細胞，大量的動物實驗表明此類細胞與組織、器官的運動、血供、免疫、損傷修復、組織再生等重要活動相關(guān)。然而終隔細胞在人體中的相關(guān)研究并不完善。一些研究顯示終隔細胞存在于人心肌、人子宮及輸卵管、胎盤組織、泌尿道、骨骼肌、肺臟、乳腺及胰腺外分泌部。終隔細胞定位于

2、這些器官的結(jié)締組織內(nèi)，與其他特殊類型的細胞相互關(guān)聯(lián)，如內(nèi)皮細胞、肌纖維、神經(jīng)細胞終端、干細胞或免疫細胞。這些研究均以形態(tài)學層面的研究為主，終隔細胞在人體中的生理作用相對而言知之甚少，而對于食管、胸腺、皮膚等器官組織中終隔細胞的研究尚未見報導。那么在這些組織中是否存在終隔細胞，若存在，它的生理學作用是什么，有沒有參與某些疾病的調(diào)控?我們選取正常人食管組織為研究對象，利用透射電子顯微鏡技術(shù)及免疫組織化學方法從形態(tài)學的角度原位觀察終隔細胞是否

3、存在；同時利用原代細胞培養(yǎng)及活細胞染色技術(shù)分離并原代培養(yǎng)終隔細胞，以尋找以上問題的解答。
　　 我們從接受手術(shù)的食管疾病患者切除的組織中獲得10份人食管標本(已通過中山倫理委員會審核，患者知情同意書已簽署)，并經(jīng)高年資病理醫(yī)生確認為正常食管組織。每份組織均分為3份：新鮮組織一份(約1mm3)用于透射電子顯微鏡(TEM)觀察；福爾馬林預制一份，用于HE切片染色及免疫組織化學法染色觀察；新鮮組織一份(無菌)用于原代終隔細胞分離，體外

4、培養(yǎng)。
　　 透射電子顯微鏡檢查。小塊的新鮮組織采取后立即投入4％戊二醛溶液，經(jīng)過固定、脫水、浸透、包埋、聚合等預處理后，利用超微切片機制備成50nm的薄片，透射電子顯微鏡下觀察并拍照。我們發(fā)現(xiàn)，在食管的肌層及粘膜層均存在典型的終隔細胞，形態(tài)學上表現(xiàn)為較小的胞體，延伸出2-3支十分長而分叉的附屬物(端支，telopodes，Tps)。端支外觀呈串珠狀，由細絲狀的胞質(zhì)(podomers)及其上膨起的顆粒狀節(jié)段(podoms)組成。

5、同時我們觀察到這些終隔細胞與人食管中的巨噬細胞、平滑肌細胞及毛細血管關(guān)系密切，鄰近的終隔細胞之間尚見到多支端支蜷曲形成迷宮樣的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。
　　 免疫組織化學法染色。福爾馬林預制人食管組織塊經(jīng)固定、包埋、切片等處理后，經(jīng)HE染色確認為食管組織。進一步經(jīng)c-kit、vimentin及cD34免疫組織化學法處理，光學顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)典型的終隔細胞，胞體及附屬的細長端支均陽性。
　　 原代終隔細胞分離，體外培養(yǎng)，相差顯微鏡觀察。

6、在無菌環(huán)境下獲取正常人食管標本，經(jīng)粉碎、消化、離心、重懸等處理得到原代終隔細胞，并利用原代細胞培養(yǎng)技術(shù)進行體外培養(yǎng)。體外培養(yǎng)第三天起，反轉(zhuǎn)相差顯微鏡下即可觀察到終隔細胞及其典型的長而呈念珠狀的端支。通常4天左右可獲得純度較高的貼壁的原代終隔細胞。為了更清楚的顯示終隔細胞的形態(tài)學特點，我們使用了幾種常見的細胞活體染色技術(shù)。亞甲藍及吉姆薩染色后，可見長達數(shù)十微米的終隔細胞，其細長的附屬端支類似一串玻璃小珠，從胞體發(fā)出的基部較粗，并逐漸變細。

7、這些特點與樹突狀細胞、成纖維細胞或成肌纖維細胞明顯不同。健那綠是一種常見的親線粒體染色劑。健那綠染色后觀察到終隔細胞胞體及端支上的膨大部分(podoms)染色明顯。
　　 終隔細胞是一種存在于結(jié)締組織中的間質(zhì)細胞，與內(nèi)皮組織、肌纖維、神經(jīng)細胞、免疫細胞等關(guān)系密切。本研究證明了人食管肌層及粘膜組織中存在典型的終隔細胞，且與毛細血管、平滑肌纖維、巨噬細胞關(guān)系密切，同時觀察到終隔細胞之間通過端支形成迷宮樣的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。我們的試驗沒有得到

8、其他學者關(guān)于終隔細胞功能的假說的直接證據(jù)。但是基于以上形態(tài)學研究，我們觀察到終隔細胞與其他間質(zhì)細胞以及終隔細胞之間通過端支形成三維立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，因此除了對組織的機械支持，我們認為終隔細胞對免疫作用、細胞間的信息傳遞及調(diào)節(jié)起一定作用?？紤]到其與毛細血管及肌細胞關(guān)系密切，終隔細胞在損傷修復、組織再生中也可能存在功用。一些與平滑肌功能、組織損傷修復作用相關(guān)的食管疾病，如賁門失遲緩癥、反流性食管炎以及食管癌等，其發(fā)生發(fā)展是否與終隔細胞功能障礙相