膳食n-6-n-3多不飽和脂肪酸配比對(duì)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 用葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎(UC)模型，觀察膳食不同n-6/n-3多不飽和脂肪酸(PUFA)配比對(duì)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎影響并初步探討其作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 健康雄性SD大鼠56只以普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，隨機(jī)分為7組:正常對(duì)照組、DSS模型組、n-6 PUFA組、n-3 PUFA組、1∶1n-6/n-3 PUFA組、5∶1n-6/n-3PUFA組和10∶1 n-6/n-3

2、PUFA組。實(shí)驗(yàn)開始后，正常對(duì)照組和DSS模型組給予基礎(chǔ)飼料，其余5組在基礎(chǔ)飼料基礎(chǔ)上添加富含n-6PUFA的紅花籽油和n-3PUFA的亞麻籽油，調(diào)節(jié)飼料中PUFA組成，根據(jù)不同配比配制總脂肪含量為10％的干預(yù)飼料飼喂大鼠3周。干預(yù)3周后，正常對(duì)照組自由飲水，其余6組經(jīng)飲水途徑連續(xù)7天均給予5％DSS水溶液造模，造模期間觀察所有大鼠體重變化、糞便性狀和有無血便等一般狀況，造模期間以及造模后7天繼續(xù)給予各干預(yù)飼料喂養(yǎng)大鼠。造模結(jié)束后，所有

3、大鼠均改為正常飲水，1周后處死大鼠。取結(jié)腸標(biāo)本，通過疾病活動(dòng)指數(shù)、大體形態(tài)、組織病理學(xué)變化和結(jié)腸濕重指數(shù)對(duì)結(jié)腸的炎癥程度作評(píng)價(jià)。生化分析檢測(cè)血清中髓過氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，用酶聯(lián)免疫(ELISA)法測(cè)定血清指標(biāo)IL-1β、IL-6、IL-10、PGE2、 LTB4和TNF-α水平，Real-time PCR法和免疫組化法分別檢測(cè)結(jié)腸組織PPAR-γ mRNA和NF-κB p65的表達(dá)。<

4、br>　　 結(jié)果:
　　 1.造模第5天模型組大鼠DAI評(píng)分顯著高于同期正常對(duì)照組（P＜0.05）;與DSS模型組和n-6 PUFA組比較，n-3 PUFA組DAI評(píng)分有降低趨勢(shì)(P＜0.01或P＜0.05);第7天DSS模型組大鼠DAI評(píng)分顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.01);造模后第8天至第14天，與DSS模型組比較，各干預(yù)組大鼠DAI評(píng)分明顯下降(P＜0.01或P＜0.05)。
　　 2.大體形態(tài)觀察顯示，DSS模

5、型組大鼠結(jié)腸腸壁外周有粘連，見充血、水腫、大小不等的潰瘍面形成，評(píng)分與正常對(duì)照組比較明顯增加(P＜0.01）;與DSS模型組比較，5∶1組結(jié)腸腸壁粘連減少，潰瘍面明顯縮小，偶有充血、水腫，大體損傷評(píng)分明顯降低（P＜0.01）。光鏡下顯示，DSS模型組結(jié)腸黏膜上皮有壞死脫落，大量中性粒細(xì)胞浸潤，并可見淋巴細(xì)胞，黏膜隱窩增寬，顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.01)。與正常對(duì)照組比較，DSS模型組大鼠體重明顯下降，結(jié)腸長度有縮短，結(jié)腸濕重指數(shù)明顯

6、增加(P＜0.05）。
　　 3.與正常對(duì)照組比較，DSS模型組大鼠血清MPO活性、MDA含量以及PGE2和TNF-a水平明顯升高(P＜0.01);與n-6 PUFA組比較，n-3 PUFA組SOD活力升高（P＜0.05），IL-6、PGE2和LTB4水平明顯降低(P＜0.01或P＜0.05);與1∶1組比較，5∶1組SOD活力和IL-10水平顯著增高(P＜0.01)，10∶1組MDA含量和IL-6水平明顯升高(P＜0.05或P

7、＜0.01)。
　　 4.PPAR-γ mRNA在DSS模型組中的表達(dá)較正常對(duì)照組顯著減少(P＜0.05);5∶1組較DSS模型組相比表達(dá)有增高(P＜0.05);與n-6 PUFA組比較，n-3 PUFA組表達(dá)顯著增加(P＜0.01）。
　　 5.DSS模型組可見大量炎性細(xì)胞的胞核表達(dá)NF-κB p65，有棕褐色染色，呈強(qiáng)表達(dá)，且明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，n-6 PUFA組中NF-κB p65在腸組織黏膜上皮呈

8、強(qiáng)陽性表達(dá)，以細(xì)胞核為主，與正常組比較差異有顯著性(P＜0.01);n-3 PUFA組NF-κB p65在結(jié)腸組織表達(dá)較n-6 PUFA組顯著降低(P＜0.05);與5∶1組比較，10∶1組NF-κB p65主要在胞核表達(dá)且有增高（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1.通過短期5％DSS溶液處理結(jié)合正常飲水1周建立的大鼠結(jié)腸炎模型有急性損傷、慢性修復(fù)的特點(diǎn)，類似人類UC的發(fā)病特點(diǎn)，為較理想的UC大鼠模型;