川芎嗪對內皮祖細胞氧化損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、目的：探討新西蘭大白兔外周血來源內皮祖細胞（EPCs）體外分離、培養(yǎng)和分化的方法，并對培養(yǎng)細胞進行鑒定。觀察過氧化氫（H2O2）誘導的內皮祖細胞氧化損傷效應以及川芎嗪（TMP）抗氧化應激的效應。 方法：采用密度梯度離心法獲取新西蘭大白兔外周血中單個核細胞（MNCs），于纖連蛋白（FN）包被的培養(yǎng)板中EBM-2完全培養(yǎng)基誘導分化得到EPCs，從細胞形態(tài)、免疫熒光、免疫細胞化學分析表面標記物鑒定EPCs。以600umol/L過氧化氫

2、（H2O2）誘導EPCs氧化應激損傷，實驗分為正常對照組，H2O2作用組，H2O2/川芎嗪干預組（川芎嗪濃度為10ug/ml），應用CCK-8法檢測H2O2和TMP對EPCs增殖的影響，流式細胞儀檢測各組細胞凋亡率，TBA法測定細胞漿中丙二醛（MDA）含量，分別采用黃嘌呤氧化酶法和比色法測定細胞培養(yǎng)液上清總超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脫氫酶（LDH）活力。 結果：新西蘭大白兔外周血分離得到的MNC5經體外誘導培養(yǎng)呈內皮細胞樣形

3、態(tài)，表達EPCs的表面標志物CD31、CD34和VEGFR-2等，顯示內吞乙?；兔芏戎鞍祝╝c-LDL）、結合荊豆凝集素1（UEA-1）等內皮細胞的功能特性，提示培養(yǎng)細胞具有EPCs的形態(tài)、功能和表面蛋白特性。H2O2抑制體外培養(yǎng)的EPCs增殖，且呈濃度依賴性。不同濃度川芎嗪作用于EPCs后可促進細胞增殖，但10ug/mlTMP較1ug/ml濃度組吸光度增加更明顯，20、50、100ug/ml濃度組與10ug/ml組相比無顯著性差異

4、。流式細胞分析顯示H2O2組細胞凋亡率與對照組相比明顯增高，川芎嗪干預組明顯抑制H2O2誘導的EPCs凋亡。H2O2可導致EPCs中MDA含量、LDH滲出量明顯增加和SOD活性的下降，而川芎嗪干預可明顯抑制EPCs的氧化應激反應。 結論：兔外周血中存在具有分化增殖能力的EPCs，可通過密度梯度離心法分離得到，在體外經誘導培養(yǎng)后可穩(wěn)定分化、擴增。H2O2抑制EPCs增殖，川芎嗪促進EPCs增殖并對H2O2誘導的EPCs凋亡和氧化損