特發(fā)性癲癇綜合征FCTE和BFIS致病基因的定位、候選克隆與GEFS+基因突變檢測(cè).pdf

1、論文分為三章：
　　 第一章、家族性皮質(zhì)性震顫伴癲癇致病基因的定位與候選克隆
　　 家族性皮質(zhì)性震顫伴癲癇(familial cortical tremor with epilepsy,FCTE)是一種較為罕見(jiàn)的特發(fā)性癲癇綜合征，呈常染色體顯性遺傳模式，于成人期起病。由日本Okuma等于1997年首先命名提出。臨床表現(xiàn)為與特發(fā)性震顫相像的以肢體遠(yuǎn)端為主的皮質(zhì)性震顫；頻率稀發(fā)的癲癇；神經(jīng)電生理檢查顯示為皮質(zhì)反射性肌陣攣的特

2、點(diǎn)；震顫和癲癇對(duì)抗癲癇藥物反應(yīng)良好；非進(jìn)展性病程、預(yù)后良好。同時(shí)表現(xiàn)有震顫、癲癇和肌陣攣等極其類似癥狀的，還見(jiàn)于另外四種分類命名有爭(zhēng)議的特發(fā)性癲癇綜合征：家族性特發(fā)性肌陣攣與癲癇(FEME)、良性成人家族性肌陣攣性癲癇(BAFME)、家族性成人肌陣攣癲癇(FAME)、常染色體顯性遺傳的皮質(zhì)性肌陣攣與癲癇(ADCME)，其中BAFME、FAME和ADCME的致病基因分別被定位于8q23.3-q24.1、2p11.1-q12.2。而FCTE

3、的致病基因尚未定位。我們?cè)谥袊?guó)湖南省收集到一個(gè)中國(guó)人FCTE大家系，所有患者均具有FCTE典型臨床表現(xiàn)。為定位和克隆該FCTE家系的致病基因，我們應(yīng)用微衛(wèi)星遺傳標(biāo)記連鎖分析的方法首先對(duì)其進(jìn)行位點(diǎn)8q23.3-q24.1、2p11.1-q12.2排除分析，結(jié)果排除該FCTE家系與2p11.1-q12.2的連鎖關(guān)系，而提示與8號(hào)染色體連鎖。基于此我們進(jìn)一步精細(xì)定位，在常染色體顯性遺傳模式下，重組率θ為0時(shí)于D8S199處獲得最大兩點(diǎn)LOD值

4、7.21，經(jīng)單體型分析，將此FCTE家系致病基因定位于D8S555與D8S1753之間約30.5cM的區(qū)間8q23.3-24.23。結(jié)合目前已知特發(fā)性癲癇致病基因以離子通道基因?yàn)橹鞯奶攸c(diǎn)，我們選擇此區(qū)間內(nèi)和緊毗鄰區(qū)的鉀離子通道基因KCNQ3、KCNV1、KCNS2，運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增、直接測(cè)序法進(jìn)行突變檢測(cè)，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)任何的序列變異，排除三個(gè)候選基因?yàn)樵揊CTE家系致病基因可能，為進(jìn)一步候選克隆奠定了重要基礎(chǔ)。這是在中國(guó)首次

5、發(fā)現(xiàn)報(bào)道FCTE家系，并首次在世界范圍內(nèi)定位了FCTE致病基因位點(diǎn)。
　　 第二章、良性家族性嬰兒驚厥致病基因的定位與候選克隆
　　 良性家族性嬰兒驚厥(benign familial infantile seizures,BFIS)是一種較為罕見(jiàn)的呈常染色體顯性遺傳的特發(fā)性癲癇綜合征。臨床表現(xiàn)為3月-10月齡尤其4月-7月齡出現(xiàn)、1歲-3歲內(nèi)可自然消退的無(wú)熱性驚厥，精神運(yùn)動(dòng)發(fā)育無(wú)異常，體查、發(fā)作間期腦電圖及神經(jīng)影像學(xué)檢

6、查正常。目前已定位3個(gè)致病基因位點(diǎn)19q12-13.1、16p12-q12和2q24。隨后發(fā)現(xiàn)部分家系與上述位點(diǎn)并無(wú)連鎖，提示BFIS還存在其它致病基因位點(diǎn)。我們?cè)谥袊?guó)湖南省收集到兩個(gè)BFIS大家系，前期工作中，在排除已報(bào)道的BFIS致病位點(diǎn)19q12-q13.1、16p12-q12、2q24和排除KCNQ2、KCNQ3、SCN2A基因突變后，其中一個(gè)家系（家系1）的致病基因提示位于其它新的位點(diǎn)；另一個(gè)家系（家系2）運(yùn)用微衛(wèi)星遺傳標(biāo)記的

7、全基因組掃描和精細(xì)定位將其致病基因定位于新位點(diǎn)1p36.12-p35.1，并對(duì)區(qū)間內(nèi)的33個(gè)候選基因進(jìn)行了相關(guān)突變檢測(cè)，但未發(fā)現(xiàn)致病性改變。本研究中，我們采用最新一代SNP遺傳標(biāo)記連鎖分析微珠芯片進(jìn)一步對(duì)BFIS家系1進(jìn)行定位，結(jié)果得到三個(gè)候選區(qū)域5q22.1-5q32、9p21.3-9p21.2和22q11.21-22q12.1。經(jīng)微衛(wèi)星遺傳標(biāo)記分析確證與5號(hào)染色體連鎖，單體型分析將此BFIS家系致病基因定位至極可能位點(diǎn)D5S2057

8、與D5S500之間約5.47cM、相當(dāng)于5q31.1-31.2的區(qū)域。對(duì)緊鄰的GABRG2基因，運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增、直接測(cè)序法進(jìn)行突變檢測(cè)，未發(fā)現(xiàn)序列變異。而對(duì)定位于lp36.12-p35.1的另一BFIS家系，繼續(xù)篩選區(qū)間內(nèi)和緊毗鄰區(qū)的另外14個(gè)新候選基因(SYTL1、FUCA1、EPHA8、SH3BGRL3、AK2、SDC3、MAN1C1、ID3、LAPTM5、PAQR7、RCC1、RUNX3、KCNQ4、GABRD)進(jìn)

9、行突變檢測(cè)，結(jié)果共發(fā)現(xiàn)13個(gè)SNP改變，其中2個(gè)為新發(fā)現(xiàn)的SNP。排除這14個(gè)基因?yàn)锽FIS新致病基因的可能，為進(jìn)一步候選克隆和最終揭示BFIS的發(fā)病機(jī)制奠定了重要基礎(chǔ)。
　　 第三章、全面性（遺傳性）癲癇伴熱性驚厥附加癥基因突變檢測(cè)
　　 全面性（遺傳性）癲癇伴熱性驚厥附加癥(generalized/genetic epilepsy with febrile seizures plus,GEFS＋)是一種家族遺傳性的特

10、發(fā)性癲癇綜合征，具有高度的表型和遺傳異質(zhì)性。目前已克隆6個(gè)致病基因：SCN1A、SCN1B、SCN2A、SCN9A、GABRD、GABRG2。我們對(duì)三個(gè)中國(guó)GEFS＋家系臨床特點(diǎn)進(jìn)行詳細(xì)分析，發(fā)現(xiàn)其臨床表型譜包括有熱性驚厥(FS)、熱性驚厥附加癥(FS＋)、失神癲癇(AS)和無(wú)熱性癲癇(AFS)，提示存在表型異質(zhì)性。對(duì)突變比例相對(duì)較大的基因SCN1A、SCN1B、GABRG2，運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增、直接測(cè)序法進(jìn)行突變檢測(cè)，結(jié)果