擬南芥抗菌核病突變體篩選及轉GO基因油菜表達研究.pdf

1、核盤菌[Sclerotiniasclerotiorum(Lib.)deBary]是一種廣譜性病原真菌，能危害75科450多種植物。在我國，S.sclerotiorum在大豆、油菜、向日葵和十字花科蔬菜上引起嚴重的菌核病，造成巨大的經濟損失。研究表明，草酸毒素在S.sclerotiorum致病過程中起關鍵作用。遺憾的是，人們至今尚未發(fā)現(xiàn)對S.sclerotiorum免疫的或有效的天然抗源。 本研究在建立了擬南芥抗菌核病篩選方法的基

2、礎上，篩選了51600株雌激素誘導激活型擬南芥T-DNA插入突變體，其中5000株采用菌絲體直接接種篩選法，篩選出抗感差異明顯的個體；其余46600株采用菌核病毒素草酸-病菌接種兩步篩選法，即先用2mmol/L草酸在MS培養(yǎng)基上篩選，存活的植株經PCR驗證，陽性植株移栽培養(yǎng)15d后，再用菌絲體接種鑒定，篩選出2株對菌核病高抗的突變體，這2株為功能缺失型突變體。 另外，本試驗還采用轉葡萄糖氧化酶基因(GO)油菜和非轉基因油菜為材料

3、，利用半定量RT-PCR技術研究轉GO油菜和非轉基因油菜以及它們分別接種菌核病病原菌72h后的防御基因的差異表達。結果發(fā)現(xiàn)，在轉GO基因油菜株系中，PR-1比非轉基因油菜有明顯的上調表達；接種菌核病后，無論在非轉基因植株或轉基因植株中，防御相關基因PDF1.2、NPR1、PR-1的表達量都比非轉基因非接菌對照高，推測可能是外源GO轉入油菜后，首先為油菜提供了一定的防御潛能，當接菌后使這些潛能釋放，激發(fā)其它防御的途徑。但這種機制有待進一步