中藥“腰痛定注射液”促進大鼠Schwann細胞體外增殖作用的實驗研究.pdf

1、目的周圍神經(jīng)損傷(PeripheralNervousTrauma，PNT)是骨傷科臨床常見的嚴重疾患，主要是由交通事故、房屋倒塌、重物打擊致肢體受到嚴重的嵌壓、牽拉、扭轉(zhuǎn)、撕裂或高速彈片、骨折脫位、產(chǎn)傷、麻醉、昏迷、昏睡時致傷等多種原因引起，導(dǎo)致周圍神經(jīng)發(fā)生不同程度的損傷。PNT后出現(xiàn)神經(jīng)出血、水腫、壞死、囊腔形成、退變膠質(zhì)化等一系列病理變化，以至神經(jīng)元喪失、軸突脫髓鞘，臨床表現(xiàn)為受損肢體遠端的運動、感覺及反射的障礙。而Schwann細

2、胞位于周圍神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)，是一種能改變神經(jīng)損傷后的微環(huán)境，防止繼發(fā)性損傷，并可形成再生軸突的引導(dǎo)通道，分泌大量神經(jīng)營養(yǎng)因子，促進和誘導(dǎo)神經(jīng)組織有效修復(fù)再生，促進肢體功能恢復(fù)。本實驗選用的“腰痛定注射液”由多味行氣活血的中藥組方，用其制成的中藥“腰痛定注射液”藥物血清對大鼠周圍神經(jīng)Schwann細胞進行體外培養(yǎng)，通過觀察加藥后細胞增殖的情況，選擇合適的藥物濃度，為研究中藥治療周圍神經(jīng)損傷的機理提供可靠的實驗依據(jù)。 方法在細胞鑒定實驗中

3、，取SD雄性大白鼠坐骨神經(jīng)，用胰酶及膠原蛋白酶Ⅰ消化后接種到培養(yǎng)瓶中，取經(jīng)傳代培養(yǎng)的Schwann細胞，用PAP方法對Schwann細胞進行S-100蛋白抗體免疫組織化學(xué)法染色鑒定，并以同樣方法檢測大鼠成纖維細胞作比 在PH值測定實驗中，用PH測定儀測定不同濃度的中藥“腰痛定注射液”藥物血清的PH值，同時檢測含10％小牛血清的DMEM細胞培養(yǎng)液作比較。 在細胞增殖實驗中，取傳代培養(yǎng)的Schwann細胞，稀釋消化后接種到培

4、養(yǎng)板上，并隨機分為實驗組和對照組，在實驗各組中分別加入不同濃度的中藥“腰痛定注射液”藥物血清，于加藥當(dāng)天及加藥后培養(yǎng)第3、5、7、9和11天進行MTT測試，并記錄MTT法分析后的實驗結(jié)果。 實驗數(shù)據(jù)經(jīng)計算機SPSS和excel軟件按多因素方差分析法和T-test進行統(tǒng)計學(xué)處理，P＜0.05為顯著性差異，檢測統(tǒng)計處理的結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示。 結(jié)果在細胞鑒定實驗中，倒置顯微鏡下觀察到Schwann細胞的細胞漿呈棕

5、黃色，而成纖維細胞呈藍色。 在PH值測定實驗中，PH測定儀顯示中藥“腰痛定注射液”制劑PH=8.25，含10％小牛血清DMEM培養(yǎng)液PH=7.40，經(jīng)培養(yǎng)液稀釋后的中藥“腰痛定注射液”PH值均降低。其中高濃度組25mg/ml和12.5mg/ml中藥“腰痛定注射液”藥物血清的PH值為8.10和7.80；中濃度組6.25mg/ml中藥“腰痛定注射液”藥物血清的PH值為7.70；低濃度組3.125mg/ml和1.5625mg/ml中藥

6、“腰痛定注射液”藥物血清的PH值為7.45和7.40。 在細胞增殖實驗中，MTT測試結(jié)果表明中濃度組6.25mg/ml中藥“腰痛定注射液”藥物血清對Schwann細胞增殖有明顯促進作用，尤其是5天后的MTT測試結(jié)果與對照組相比，差異有顯著性意義(P＜0.05)；高濃度組25mg/ml和12.5mg/ml中藥“腰痛定注射液”藥物血清則顯示抑制作用，3天后的MTT測試結(jié)果與對照組比較，差異均有顯著性意義(P＜0.05)：低濃度組3.