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文檔簡介
1、目的:⑴構(gòu)建腦缺血/再灌注大鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞靜脈輸注移植治療模型,探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植對腦缺血再灌注大鼠腦梗死體積和神經(jīng)功能的影響。⑵通過觀察腦缺血/再灌注大鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植后腦白質(zhì)組織學(xué)相關(guān)指標(biāo),研究CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對缺血后腦白質(zhì)損傷的作用。
方法:①選用健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,體重275g-300g。將動物隨機分為
2、:正常組(co)、假手術(shù)組(sham)和手術(shù)組。采用改良的Zealonga線栓法對手術(shù)組大鼠施行大腦中動脈阻塞缺血再灌注(MCAO/R)術(shù)。手術(shù)組分為以下三個亞組:調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植組(Treg組),經(jīng)股靜脈輸注移植2×106個大鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,構(gòu)建調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植治療模型;脾細(xì)胞輸注移植組(SP組),經(jīng)股靜脈輸注移植同等數(shù)量的脾細(xì)胞;PBS輸注組(PBS組)經(jīng)股靜脈注入等體積的PBS緩沖液。分別在移植術(shù)后24h
3、和72h對大鼠神經(jīng)功能進(jìn)行評定,術(shù)后72h斷頭取腦,采用TTC染色和圖像分析軟件計算梗死體積,并對手術(shù)組腦梗死體積和神經(jīng)功能學(xué)評分進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計學(xué)分析。②選用健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,體重275g-300g。將動物隨機分為:正常組(co)、假手術(shù)組(sham)和手術(shù)組。采用改良的Zealonga線栓法對手術(shù)組大鼠施行大腦中動脈阻塞缺血再灌注(MCAO/R)術(shù)。手術(shù)組分為以下三個亞組:調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植組(Tr
4、eg組),經(jīng)股靜脈輸注移植2×106個大鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,構(gòu)建調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植模型;脾細(xì)胞輸注移植組(SP組),經(jīng)股靜脈輸注移植同等數(shù)量的脾細(xì)胞;而在PBS輸注組(PBS組)經(jīng)股靜脈注入等體積的PBS緩沖液。術(shù)后72小時斷頭取腦,制備腦組織石蠟切片,免疫熒光染色觀察缺血半球寡突膠質(zhì)細(xì)胞(Oligedendrocytes,OLs)及髓鞘堿性蛋白(MBP)、神經(jīng)絲蛋白200(NF200)標(biāo)記的軸突,并對OLs數(shù)量及MBP
5、、NF200熒光強度進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計學(xué)分析。
結(jié)果:⑴調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植組腦梗死體積及梗死半球體積占健側(cè)體積的比值較SP組和PBS組均顯著減小(p<0.01);在術(shù)后24h、72h神經(jīng)功能評分實驗中,Treg組ZeaLonga評分均顯著低于SP組和PBS組(p<0.01),24h、72h mNSS評分見Treg組較SP組和PBS組亦顯著降低(p<0.05)。⑵免疫熒光顯微鏡檢測腦缺血后腦白質(zhì)相關(guān)指標(biāo)顯示:手術(shù)組缺血半球梗死邊
6、緣區(qū)紋狀體部位MBP、NF200較正常組和假手術(shù)組同側(cè)半球相比,熒光強度顯著降低(p<0.05),Treg組較SP組、PBS組上述指標(biāo)熒光強度均顯著增強(p<0.05)。觀察各組缺血半球胼胝體部位OLs可見,手術(shù)組較對照組數(shù)量顯著減少(p<0.01),Treg組較SP組、PBS組數(shù)量顯著增多(p<0.01)。
結(jié)論:①采用股靜脈輸注移植方式可以成功構(gòu)建出穩(wěn)定的大鼠腦缺血再灌注CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞輸注移植治療模型。
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