計算機輔助設計在C-0301脂質體藥物研制中的應用.pdf

1、在傳統藥物研發(fā)中，無論是開發(fā)初期的配方篩選、工藝優(yōu)化、質量標準建立，還是后期的中試生產、流程控制、產業(yè)化放大確立，始終涉及從大量相關研究因素中，尋找最佳條件水平的組合，其間通常經歷漫長的開發(fā)周期，需要投入巨大人力、物力和財力。實驗計劃法(Designofexperiments，DOE)是一種以方差分析(AnalysisofVariance，ANOVA)為基礎，利用統計理論，結合計算機數據處理技術，快速確定核心技術因素以及優(yōu)化條件的現代產

2、品開發(fā)方法。運用DOE方法到制藥業(yè)，可以大大縮短開發(fā)周期，減少成本，提高產品可靠性。近十年來，特別在高端藥物開發(fā)領域，由于依賴精確的條件控制和最佳參數優(yōu)化，DOE在諸如納米給藥系統等開發(fā)領域更受到廣泛關注。 前列腺素E1(ProstaglandinE1,PGE1)是對血管具有生物學作用的前列腺素(PG)物質之一，具有擴張血管、降低血壓、抑制血小板聚集、抑制動脈粥樣硬化等作用。PGE1在生物體內極不穩(wěn)定，首次經過肺循環(huán)，大約60％

3、～90％被代謝；且對血管刺激性較大，靜脈注射可產生局部刺激性。C-0301是一種正在前期研究開發(fā)階段中的前列腺素類抗血栓性疾病藥物，它以環(huán)戊烷脂肪族側鏈的前列腺素母體化合物為主干結構，進行取代基團修飾，保留了以往前列腺素類藥物的生理活性，同時化學穩(wěn)定性有所提高，肺循環(huán)失活率降低。 脂質體作為藥物載體攜載C-0301可能會改變藥物的運輸，消除其對血管內壁的刺激，同時減少在肺部的滅活，并有可能加強其作用的靶向性，延長循環(huán)半衰期，從而

4、提高藥效，減少用量，減輕毒副反應。脂質體的制備及質量控制過程中，涉及大量相關因素，需要重復試驗不斷調整參數,工作量大，流程“瓶頸”多。本研究擬采用DOE方法，對C-0301脂質體的處方及制備方法進行優(yōu)化，建立質量控制方法，并且快速建立可以面向工業(yè)界量產需要的技術轉移參數條件。 目的：1.探討計算機輔助設計(computeraideddesign，CAD)在藥物研制中的應用。2.優(yōu)化C-0301脂質體處方，研制含量符合要求，包封率

5、較高的制劑。3.建立C-0301脂質體的質量控制方法，用于脂質體中C-0301含量檢測、有機溶劑異丙醇殘留量檢測、磷脂的檢測。4.考察C-0301脂質體在不同條件下的穩(wěn)定性，為其儲存條件的選擇提供一定的指導和參考。5.為C-0301脂質體的中試和產業(yè)化生產奠定一定的基礎。 方法：1.DOE方法篩選影響檢測方法的主要因素，并進一步優(yōu)化得出最佳值。2.DOE方法設計關鍵質量標準檢測方法的穩(wěn)健性試驗及中間精密度試驗。3.逆向蒸發(fā)法制備

6、C-0301脂質體。4.HPLC測定C-0301含量。5.GC測定有機溶劑異丙醇含量。6.HPLC-ELSD測定磷脂含量。7.DOE方法篩選并優(yōu)化C-0301脂質體處方及制備方法。8.優(yōu)化后的C-0301脂質體分別置于4℃、25℃、40℃和光照4500LX條件下進行穩(wěn)定性考察。 結果：1.應用計算機輔助設計可同時比較幾個因素及其交互作用的效果，減少實驗次數50％以上，降低了開發(fā)成本。2.建立了HPLC檢測C-0301含量方法,C

7、-0301保留時間在7.0min左右，在1.5～100ug/ml濃度范圍內，線性關系良好，R2=0.9999，平均回收率99.48％,穩(wěn)健性及中間精密度試驗，確定的檢測條件對方法無顯著影響。3.建立了GC檢測有機溶劑異丙醇含量方法，有機溶劑異丙醇保留時間在2.3min左右，在0.4～6.4μg/ml濃度范圍內，線性關系良好，R2=0.9992，平均回收率98.68％,檢測過程中應嚴格控制進樣時間，其余各因素對方法無顯著影響。4.建立了H

8、PLC-ELSD檢測磷脂含量的方法,PC保留時間在19.5min左右,PE保留時間在17.1min左右，兩峰分離度大約為2.8，PC在70～560ug/ml范圍內、PE在67.5～540ug/ml范圍內有良好的線性關系。影響PC保留時間的主要因素為流動相B中水的含量及流速，影響兩峰分離度的主要因素為流動相B中水的含量。5.篩選并優(yōu)化，獲得C-0301脂質體的最佳處方，其包封率達97.5％，粒徑為335nm,多分散指數為0.27。6.影響

9、C-0301脂質體包封率的主要因素為類脂總量、水化溫度、水化時間，影響粒徑的主要因素為超聲時間和類脂總量，影響多分散指數的主要因素為超聲時間。7.在4℃、25℃、40℃和光照4500LX條件下，考察時間內,C-0301脂質體包封率、粒徑及多分散指數均無顯著變化。 結論：基于DOE技術，本研究：1.建立了穩(wěn)定性好、重復性高，線性關系良好的C-0301脂質體HPLC分析方法。2.建立了穩(wěn)定性好、重復性高，線性關系良好地C-0301脂