轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1在擴(kuò)張囊外纖維包膜中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的：探討轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（Transforming Growth Factor-Betal，TGF-β1）在擴(kuò)張囊外纖維包膜中的表達(dá)及臨席意義，明確擴(kuò)張囊外纖維包膜成纖維細(xì)胞形成與變化的原因，進(jìn)一步研究控制擴(kuò)張囊外纖維包膜形成與變化的方法，以提高擴(kuò)張后皮瓣修復(fù)皮膚軟組織缺損及器官再造的成功率。
　　 方法：
　　 1、臨床資料
　　 本組病例均為2007年以來(lái)我科收治的患者，共計(jì)30例。每個(gè)患者均應(yīng)用一個(gè)或多個(gè)

2、擴(kuò)張器行皮膚軟組織擴(kuò)張術(shù)，以擴(kuò)張皮瓣修復(fù)不同部位的各種病變所致的皮膚軟組織缺損。其中男性16人，女性14人，年齡17歲至33歲，平均年齡為26歲。
　　 2、分組
　　 實(shí)驗(yàn)分為兩組：實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，各30例。本實(shí)驗(yàn)采用自身對(duì)照。實(shí)驗(yàn)組取材于擴(kuò)張囊外纖維包膜。對(duì)照組取材為一期手術(shù)擴(kuò)張器植入時(shí)所剝離腔隙中與擴(kuò)張器相鄰的皮下組織。即原擴(kuò)張器旁組織（軀干為皮下脂肪組織，頭部為冒狀腱膜和皮下脂肪組織復(fù)合體）。
　　 3、

3、擴(kuò)張器植入及注水方法
　　 本組病例均在局部麻醉下進(jìn)行。術(shù)中將患者擴(kuò)張器植入腔隙剝離完成后，以雙極電凝徹底止血，觀察無(wú)活動(dòng)性出血后，植入相應(yīng)皮膚軟組織擴(kuò)張器。待術(shù)后第八天開始擴(kuò)張注水，擴(kuò)張方法采用常規(guī)擴(kuò)張，無(wú)麻醉狀態(tài)下注水，隔2-5日注水?dāng)U張一次，每次注水量視皮瓣張力大小而定，以皮瓣血管指壓反應(yīng)4-5秒為限。每只皮膚軟組織擴(kuò)張器注水達(dá)到額定擴(kuò)張容量的1.5倍后停止注水。
　　 4、取材
　　 對(duì)照組于擴(kuò)張器植入即

4、一期手術(shù)時(shí)取材，局部麻醉狀態(tài)下，手術(shù)切取擴(kuò)張器旁任意部位1cm×1cm大小皮下組織，平鋪于無(wú)菌紗布上，四角固定，標(biāo)本經(jīng)PBS液沖洗后放入4％中性戊二醛固定，制作石蠟切片，其中石蠟切片分別作常規(guī)。HE染色、Masson染色及免疫組化。切取0.1cm×0.1cm×0.3cm大小皮下組織標(biāo)本，以中性甲醛固定，送透射電鏡觀察。
　　 實(shí)驗(yàn)組于完成擴(kuò)張后即二期手術(shù)時(shí)取材，局部麻醉狀態(tài)下，手術(shù)切取擴(kuò)張器表面任意部位1cm×1cm大小纖維包膜

5、標(biāo)本，平鋪于無(wú)菌紗布上，四角固定，標(biāo)本經(jīng)PBS液沖洗后放入4％中性戊二醛固定，制作石蠟切片，石蠟切片分別作常規(guī)HE染色、Masson染色及免疫組化。切取0.1cm×0.1cm×0.3cm大小纖維包膜標(biāo)本，以中性甲醛固定，送透射電鏡觀察。
　　 5、觀測(cè)指標(biāo)
　　 （1）光鏡下觀察常規(guī)HE染色切片的組織學(xué)結(jié)構(gòu)差異；光鏡下觀察：Masson染色切片，比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組標(biāo)本中膠原纖維的含量差異；光鏡下觀察免疫組化顯色的強(qiáng)弱，比

6、較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組纖維包膜中TGF-β1含量。（2）透射電鏡下觀察實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組標(biāo)本成纖維細(xì)胞數(shù)量，以對(duì)比兩組中成纖維細(xì)胞分泌膠原的差異。
　　 結(jié)果
　　 1.光鏡觀察
　　 1.1 HE染色
　　 光鏡下可見：（1）實(shí)驗(yàn)組：可見大量的成纖維細(xì)胞，并有新生薄壁的毛細(xì)血管散在于視野中；并有大量中幼稚期的成纖維細(xì)胞，幼稚期的成纖維細(xì)胞胞體較大，兩端常有突起，胞漿呈藍(lán)色；而對(duì)照組中可見大量的脂肪細(xì)胞，偶見成熟期

7、的成纖維細(xì)胞（纖維細(xì)胞），及散在的毛細(xì)血管，并可見散在的中性粒細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)組中幼稚期的成纖維細(xì)胞數(shù)目遠(yuǎn)多于對(duì)照組是其最重要特點(diǎn)。
　　 1.2 Masson染色
　　 光鏡下觀察Masson染色切片，實(shí)驗(yàn)組：纖維包膜全層綠色，成纖維細(xì)胞多呈長(zhǎng)梭形，松散分布，有散在內(nèi)皮細(xì)胞樣梭形細(xì)胞。對(duì)照組：原擴(kuò)張器旁組織全層成灰色，偶見成纖維細(xì)胞，核呈灰黑色，卵圓形，排列疏松。
　　 1.3免疫組織化學(xué)染色
　　 實(shí)驗(yàn)組在

8、纖維包膜組織中，TGF-β1蛋白陽(yáng)性表達(dá)的黃色顆粒主要分布于成纖維細(xì)胞的胞漿內(nèi)及細(xì)胞外基質(zhì)中，且染色強(qiáng)，面積大。而在對(duì)照組中，陽(yáng)性顆粒主要分布在間質(zhì)血管周圍的成纖維細(xì)胞內(nèi)，且染色弱。30例患者纖維包膜組織TGFβ1蛋白的免疫組化染色均示陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率100％，與對(duì)照組對(duì)比二者有顯著差異（表1），x2檢驗(yàn)，P<0.01，并且纖維包膜高表達(dá)為21例，低表達(dá)為9例，也明顯高于對(duì)照組（表2），x2檢驗(yàn)，P<0.01，二者也有顯著差異。

9、　　 2.透射電鏡觀察
　　 實(shí)驗(yàn)組：成纖維細(xì)胞內(nèi)可見擴(kuò)張的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，少見脫顆粒現(xiàn)象，線粒體嵴基本完整，可見許多明顯的微絲結(jié)構(gòu)，核糖體數(shù)量未見明顯減少。成纖維細(xì)胞長(zhǎng)梭形，細(xì)胞核呈長(zhǎng)橢圓形，胞質(zhì)內(nèi)有大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，有許多線粒體。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)高度擴(kuò)張成池狀。有一個(gè)不典型的高爾基復(fù)合體。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有微絲，有許多游離核糖體。常染色質(zhì)豐富，細(xì)胞周圍有許多成熟的膠原纖維。對(duì)照組：成纖維細(xì)胞內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張成池狀，數(shù)量明顯少，脫顆?，F(xiàn)象明顯，

10、線粒體部分或大部分嵴融合或消失，偶見正常高爾基氏體，未見或偶見微絲結(jié)構(gòu)，游離核糖體數(shù)量減少。
　　 結(jié)論
　　 （1）在實(shí)驗(yàn)組擴(kuò)張包膜中TGF-β1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)明顯高于對(duì)照組，P<0.01，二者有顯著差異，證實(shí)了TGF-β1與擴(kuò)張囊外的纖維包膜產(chǎn)生有著密切關(guān)系，是該瘢痕組織產(chǎn)生的重要原因，（2）在成纖維細(xì)胞內(nèi)TGF-β1蛋白水平的過度表達(dá)表明，成纖維細(xì)胞過度分泌膠原亦是促進(jìn)纖維包膜形成的原因。上述研究發(fā)現(xiàn)為臨床上控制纖