5-脂氧合酶在人腦膠質瘤中的表達及其與膠質瘤細胞增殖、凋亡的關系.pdf

1、目的： 本研究通過分析5-脂氧合酶(5-1ipoxygenase，5-LOX)及細胞增殖核抗原Ki-67在人腦膠質瘤組織中的表達特點及其相關性，探討5-LOX與膠質瘤細胞增殖的關系；通過分析5-LOX的特異性抑制劑AA86l對膠質瘤U-251細胞增殖與凋亡的影響，探討M861影響U-251細胞增殖與凋亡的可能機制，為抗5-LOX“靶點”治療膠質瘤提供理論依據(jù)。 方法： 收集60例腦膠質瘤標本，分為低度惡性膠質瘤組

2、(Ⅰ級-Ⅱ級，WHO2000)及高度惡性膠質瘤組(Ⅲ級-Ⅳ級，WH0 2000)，另設14例腦外傷行減壓術患者非腫瘤腦組織為對照組。應用免疫組織化學和RT-PCR檢測對照組、低度惡性膠質瘤組及高度惡性膠質瘤組中5-LOX及Ki-67的表達特點，并分析二者相關性。應用5-LOX特異性抑制劑AA861作用于膠質瘤U251細胞，根據(jù)培養(yǎng)液中M86l濃度分為25、50及100μmol/L組，對照組中所用培養(yǎng)液不含AA861。倒置相差顯微鏡和透射

3、電鏡觀察細胞凋亡；繪制細胞生長曲線；MTT法檢測細胞抑制率；AO/EB熒光染色測定細胞凋亡；Caspase-3活性檢測試劑盒檢測AA861干預后細胞內Caspase-3活性變化。 結果： 1.5-L,OX蛋白在對照組、膠質瘤組均可表達，在膠質瘤組的表達顯著高于對照組(P<0.01)；在高度惡性膠質瘤組的表達顯著高于低度惡性膠質瘤組(P<0.01)；Ki-67蛋白在對照組、膠質瘤組均可表達，在膠質瘤的表達顯著高于對照組(P

4、<0.01)；在高度惡性膠質瘤組中的表達顯著高于低度惡性膠質瘤組(P<0.01)：5-LOK蛋白和Ki-67蛋白在膠質瘤中的表達呈正相關(γ=0.875，P<0.01)，回歸方程為γ=0.721+0.79X。 2、 5-LOXmRNA在對照組、膠質瘤組均可表達，在膠質瘤組的表達顯著高于對照組(P<0.01)；在高度惡性膠質瘤組的表達顯著高于低度惡性膠質瘤組(P<0.05)；Ki-67mRNA在對照組、膠質瘤組均可表達，在膠質瘤組

5、的表達顯著高于對照組(P<0.01)；在高度惡性膠質瘤組中的表達顯著高于低度惡性膠質瘤組(P<0.01)； 5-LOXmRNA和Ki-67mRNA在膠質瘤中的表達呈正相關(γ=0.781，P<0.01)，回歸方程為Y=0.124+0.89X。 3、通過倒置相差顯微鏡和透射電鏡觀察，AA861可誘導U-251細胞發(fā)生凋亡形態(tài)學變化。 4、細胞生長曲線顯示不同濃度的AA861對U251細胞增殖有明顯的抑制作用，并呈時間與劑量

6、依賴關系；MTT法檢測細胞生長抑制效應顯示，在同一濃度各時間點之間比較，各組之間均有顯著差異(P<0.01)，在同一時間點各濃度間比較，除24h，25μMol/L組和50μM0l/L組之間以及25μMol/L組與對照組無顯著差異(P>0.05)，其余各組之間均有顯著差異(P<0.01)，呈時間與劑量依賴關系。 5、AO/EB熒光染色顯示25、50、100μ mol/LAA861作用后各組的細胞凋亡率，在同一濃度各時間點之間均有顯

7、著差異(P<0.05)；在同一時間各濃度間比較，僅24h，25μMol/L組和50μMol/L組之間無顯著差(P>0.05)，其余各組均有顯著差異(P<0.05)，呈時間與劑量依賴關系。 6、Caspase-3活性檢測試劑盒檢測表明，25、50及100 u mol/L組A405nm值在各時間點均顯著高于對照組(P<0.05)；同一時間點不同濃度下，僅在4h時間點25μmol/L組與50μmol/L組之間A40snm值沒有差異性(

8、P>0.05)，其余各組的A405nm值比較均具有差異性(P<0.05)，A405nm值隨濃度升高而升高；同一濃度下不同時間點，除對照組外，其余各組A405nm值之間具有差異性(P<0.05)，A405nm值隨作用時間延長而升高，呈時間劑量依賴效應。 結論： 1、5-LOX在腦膠質瘤和正常腦組織中均表達，且與腦膠質瘤的病理分級相關；Ki-67在腦膠質瘤和正常腦組織中均表達，且與腦膠質瘤的病理分級相關；表明5-LOX及Ki