TR3負(fù)調(diào)控轉(zhuǎn)錄輔激活因子p300的機(jī)制.pdf

1、p300可以通過(guò)形成激活復(fù)合物或者通過(guò)促進(jìn)組蛋白乙?；瘉?lái)調(diào)節(jié)一系列轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄活性。它在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)節(jié)多個(gè)信號(hào)通路的過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在不同的外界生理刺激條件下，p300通過(guò)調(diào)節(jié)基因表達(dá)，從而引起一系列生理功能的變化，如細(xì)胞增殖、分化和凋亡。 核孤兒受體TR3屬于類固醇/甲狀腺受體超家族成員。TR3是一種立早基因，可以被血清、佛波酯和各種生長(zhǎng)因子等誘導(dǎo)表達(dá)。TR3在細(xì)胞凋亡、增殖、分化和發(fā)育等過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。

2、我們實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)證實(shí)TR3能夠與p53結(jié)合，抑制p53的乙?；娃D(zhuǎn)錄活性，從而在mRNA水平下調(diào)MDM2。我們還發(fā)現(xiàn)，TR3可以作為一個(gè)負(fù)調(diào)節(jié)因子，通過(guò)與p300競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合視黃酸受體RXRα來(lái)抑制RXRα乙?；?，從而使p300誘導(dǎo)的RXRα轉(zhuǎn)錄活性被抑制。這些前期結(jié)果引起我們的思考，即TR3是否能夠通過(guò)調(diào)控p300依賴的乙?；禺愋载?fù)調(diào)控其它一些轉(zhuǎn)錄因子呢?TR3是否會(huì)影響p300的組蛋白乙?；富钚阅? 為此，我們對(duì)TR3調(diào)控p

3、300介導(dǎo)的乙?；瘷C(jī)制開(kāi)展深入的研究。我們發(fā)現(xiàn)，TR3可以負(fù)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄輔激活因子p300的活性。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)表明，TR3可以和p300相互作用，并且抑制由p300誘導(dǎo)的一系列轉(zhuǎn)錄因子的乙?；胶娃D(zhuǎn)錄活性。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，p300分子上的一個(gè)保守序列TRAM(Transcriptionaladaptermotif)和TR3分子上的特殊FLELFIL氨基酸序列是二者相互作用的關(guān)鍵序列。TR3通過(guò)和p300結(jié)合，完全覆蓋了p300組蛋白乙酰

4、化酶的活性區(qū)域，從而抑制組蛋白乙?；富钚?HAT)。當(dāng)TRAM區(qū)域被切除，TR3仍然可以結(jié)合到p300的CH2區(qū)域，但卻無(wú)法抑制HAT活性。因此，TRAM是TR3抑制HAT活性的必要結(jié)合位點(diǎn)。當(dāng)全長(zhǎng)TR3或者TR3缺失突變體中FLELFIL序列的F和E被A取代后，TR3抑制p300的HAT活性能力則喪失。這些結(jié)果不僅說(shuō)明了TR3抑制p300的HAT活性可能依賴于FLELFIL和TRAM序列的相互結(jié)合和識(shí)別，也證實(shí)了FLELFIL序列對(duì)

5、于TR3調(diào)控不同的轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄激活活性非常關(guān)鍵。 另外，我們從真菌中提取了一個(gè)TR3激動(dòng)劑，它可以抑制p300的HAT活性。更重要的是，TR3可以作為這個(gè)激動(dòng)劑的特異靶點(diǎn)，因?yàn)橛胹iRNA沉默內(nèi)源TR3后，激動(dòng)劑就不能抑制p300的HAT活性和轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄激活活性。用TR3激動(dòng)劑處理乳腺癌細(xì)胞后，AR和p300介導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞增殖被明顯地抑制。因此，我們的研究不僅證實(shí)TR3能夠通過(guò)抑制p300的HAT活性來(lái)抑制乳腺癌細(xì)胞增殖