脂質(zhì)體介導Survivin反義寡核苷酸增強阿霉素誘導肝癌細胞株HepG2凋亡的研究.pdf

1、目的：肝癌(hepatocelular carcinoma，HCC)，是我國最常見的惡性腫瘤之一，惡性程度高、預后差，嚴重威脅著人類生命與健康。目前，手術切除仍是治療HCC首選和較有效的方法?；熓荋CC一項重要的輔助治療手段，但對正常細胞的毒性和腫瘤細胞的耐藥性是化療面臨的兩大難題。研究表明，Survivin是迄今發(fā)現(xiàn)的最強的凋亡抑制因子，并具有抑制細胞凋亡和調(diào)節(jié)細胞周期雙重功能，與腫瘤的化療耐藥性密切相關。本課題利用脂質(zhì)體介導Sur

2、vivin反義寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide，ASODN)研究其增強阿霉素(adriamycin，ADM)誘導肝癌細胞猾亡的作用。
　　 方法：通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染Survivin ASODN進入肝癌細胞，運用RT-PCR和Western blot檢測Survivin的變化，MTT比色法檢測細胞的增殖抑制，流式細胞儀(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測肝癌細胞的凋亡率。用ADM處理后，M

3、TT比色法檢測細胞的增殖抑制，F(xiàn)CM檢測細胞的凋亡指數(shù)的變化。
　　 結果：在轉(zhuǎn)染了Survivin的ASODN24小時后，ASODN Survivin各組均顯示mRNA和蛋白的表達下調(diào)，以800ng/ml組最為明顯，與對照組比較有顯著性差異(P<0.05)；MTT發(fā)現(xiàn)Survivin ASODN處理后各組細胞增殖活性均有不同程度降低；FCM檢測發(fā)現(xiàn)HepG2細胞在400ng/ml，600ng/ml，800ng/ml組的ASOD

4、N在作用24小時后凋亡率可分別為7.45±0.14％，13.15±0.37％，35.75±0.68％，與對照空白組0.54±0.05％和SODN轉(zhuǎn)染組0.56±0.08％比較有顯著性差異(P<0.05)。在加用ADM后，600ng/mlASODN組的細胞凋亡率可達41.35±0.68％，與單獨使用ADM和轉(zhuǎn)染ASODN后的凋亡率16.94+±.54％和15.07±0.35％比較有顯著性差異。而MTT比色實驗顯示空白對照組與ADM組和AS

5、ODN組在轉(zhuǎn)染細胞24小時后，細胞增殖抑制有明顯的差異(P<0.05)，而ADM+ASODN組與其余三組比較均有顯著性差異(P<0.05)。
　　 結論：采用脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染針對Survivin設計的ASODN，能封閉Survivin基因，下調(diào)Survivin蛋白及mRNA的表達，并促進HepG2細胞的凋亡及抑制肝癌細胞生長。ASODN封閉Survivin的表達能加強ADM誘導肝癌細胞凋亡，推測其可增加ADM化療敏感性，改善常規(guī)化