Er-YAG激光聯(lián)合根管沖洗劑對(duì)根尖外多細(xì)菌生物膜的殺菌作用研究.pdf

1、根管治療術(shù)是牙髓病與根尖周病最常用的臨床治療方法，然而由于多樣的感染細(xì)菌、復(fù)雜的根管系統(tǒng)和不當(dāng)操作等原因，使得一些患牙經(jīng)過(guò)反復(fù)治療仍然遷延不愈，即成為所謂的頑固性根尖周炎。而形成頑固性根尖周炎的主要原因就是在其患牙根尖形成了根尖外的生物膜。
　　根尖外生物膜是細(xì)菌粘附于根尖牙骨質(zhì)上形成的細(xì)菌群落，由多種細(xì)菌鑲嵌于蛋白質(zhì)和多糖的基質(zhì)中形成。根尖外生物膜中的細(xì)菌以革蘭氏陽(yáng)性厭氧菌或兼性厭氧菌為主，比如糞腸球菌、衣氏放線(xiàn)菌、血鏈球菌等等

2、。其中糞腸球菌是根尖病變中最常被檢出的細(xì)菌，含有脂磷壁酸、溶細(xì)胞素、肽聚糖等多種毒力因子導(dǎo)致炎癥的產(chǎn)生，并且能夠促進(jìn)生物膜的形成，使細(xì)菌具有更強(qiáng)的致病性并且難以被去除。衣氏放線(xiàn)菌可能與慢性根尖炎癥有關(guān)，導(dǎo)致竇道產(chǎn)生。血鏈球菌也常在根尖部檢出，能夠造成根管的持續(xù)感染。而生物膜的形成更能夠延緩抗菌素的擴(kuò)散，增強(qiáng)細(xì)菌的耐藥性，使細(xì)菌更難以殺滅；同時(shí)也使得細(xì)菌的毒性產(chǎn)物更易聚集，提高細(xì)菌毒性。因此在治療頑固性根尖周炎的過(guò)程中如何有效得去除根尖周

3、的生物膜變得尤為重要。
　　臨床上治療頑固性根尖周炎最常用的方法是進(jìn)行根尖切除術(shù)。根尖切除術(shù)是一種根管外科手術(shù)，主要應(yīng)用于傳統(tǒng)根管治療術(shù)無(wú)法治愈的情況下，用手術(shù)的手段清除根尖外的生物膜和感染組織，阻斷炎癥來(lái)源，從而達(dá)到消除癥狀，保存患牙的目的。要達(dá)到這一目的，要合理設(shè)計(jì)手術(shù)切口；刮除病變組織、根尖外細(xì)菌以及超充材料，保證感染去除；切除根尖3mm,再對(duì)根尖處進(jìn)行倒預(yù)備，根尖倒充填來(lái)封閉根管系統(tǒng)。然而進(jìn)行根尖切除就必定會(huì)導(dǎo)致牙根長(zhǎng)度的

4、減少，使得牙根的支持力下降，尤其不適用于牙周炎患者，以及要做后期修復(fù)治療的患者。因此考慮利用其它方法，在不進(jìn)行根尖切除的情況下去除根尖外生物膜，達(dá)到治愈患牙的效果。
　　Er：YAG激光自其應(yīng)用于牙體組織開(kāi)始，就因熱損傷小、能精確切割、減少出血、有抗菌能力等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用。研究發(fā)現(xiàn)，Er：YAG激光對(duì)于根管內(nèi)包括糞腸球菌在內(nèi)的細(xì)菌都具有很好的殺滅作用。尤其是當(dāng)其與根管沖洗液聯(lián)合應(yīng)用的時(shí)候，激光激發(fā)沖洗液產(chǎn)生空氣泡沫和脈沖壓力波，

5、進(jìn)一步發(fā)揮激光和沖洗液的殺菌效果，能夠有效去除根尖和牙本質(zhì)小管內(nèi)的細(xì)菌。同時(shí)Er：YAG還能夠減少細(xì)菌毒素在牙骨質(zhì)中的擴(kuò)散，抑制生物膜的再生。然而國(guó)內(nèi)外對(duì)于Er：YAG激光聯(lián)合根管沖洗劑在根尖外的應(yīng)用研究還很少。因此，本文考慮在體外建立多細(xì)菌生物膜，以Er：YAG激光聯(lián)合多種根管沖洗液進(jìn)行處理，觀察細(xì)菌形態(tài)和數(shù)量的改變，為Er：YAG激光應(yīng)用于根尖外生物膜做參考。
　　一、多細(xì)菌生物膜在牛牙骨質(zhì)片上的形成過(guò)程研究
　　選擇糞

6、腸球菌、血鏈球菌以及衣氏放線(xiàn)菌作為研究細(xì)菌，通過(guò)繪制它們的生長(zhǎng)曲線(xiàn)，確定在牙骨質(zhì)片上進(jìn)行細(xì)菌接種的順序。將牛牙牙根切開(kāi)，切下牙根表面的牙骨質(zhì)，形成牙骨質(zhì)片，消毒后接種細(xì)菌。先接種衣氏放線(xiàn)菌培養(yǎng)48h后，再接種另外兩種細(xì)菌進(jìn)行共同培養(yǎng)。并在培養(yǎng)期間，每天拿取一個(gè)牙骨質(zhì)片樣本用掃描電子顯微鏡（SEM）觀察，確定選擇的細(xì)菌確實(shí)可以在體外牛牙骨質(zhì)片上形成生物膜，并且了解這種生物膜的形成過(guò)程，以及生物膜成熟所需要的培養(yǎng)時(shí)間。
　　二、Er:

7、YAG激光聯(lián)合幾種根管沖洗劑對(duì)體外多細(xì)菌生物膜作用的掃描電子顯微鏡觀察
　　根據(jù)實(shí)驗(yàn)一的研究建立體外根尖多細(xì)菌生物膜模型。選用幾種具有消毒作用的沖洗劑：次氯酸鈉（sodium hypochlorite，NaClO）、洗必泰（chlorhexidine，CHX）以及強(qiáng)酸性電解質(zhì)水（strong acid electrolyzed water，SAEW）。將牙骨質(zhì)片樣本隨機(jī)分為四個(gè)實(shí)驗(yàn)組和兩個(gè)對(duì)照組。四個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別為A(5.25％ N

8、aClO/Er：YAG)、B(0.5%NaClO/Er：YAG)、C(2% CHX/Er：YAG)和D(SAEW/Er：YAG)，E（生理鹽水）和F（5.25% NaClO）分別為陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組。每組又分為三個(gè)亞組，即處理時(shí)間分別為30s、1min和3min。按分組進(jìn)行相應(yīng)處理后用4%的多聚甲醛固定樣本12h，然后用30%、50%、70%、80%、90%的乙醇溶液脫水一次各15min，100%酒精脫水兩次每次15min。待樣本干

9、燥后噴金，用SEM進(jìn)行觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)除了生理鹽水組之外，其他各組的細(xì)菌的數(shù)量以及形態(tài)都發(fā)生了變化，但不同組間的變化程度有所不同。提示 Er:YAG激光與幾種根管沖洗劑聯(lián)合對(duì)于根尖外生物膜有殺菌作用，但效果與根管沖洗劑的種類(lèi)以及作用時(shí)間有關(guān)。
　　三、Er:YAG激光聯(lián)合幾種根管沖洗劑對(duì)體外多細(xì)菌生物膜的細(xì)菌定量研究
　　在實(shí)驗(yàn)二的基礎(chǔ)上，具體研究各組細(xì)菌數(shù)量的變化情況，對(duì)處理組的殺菌效果進(jìn)行定量分析。提取糞腸球菌的DNA，進(jìn)

10、行普通PCR、瓊脂糖凝膠電泳、切膠、膠回收，回收所得的DNA片段作為實(shí)時(shí)熒光定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)品，制作細(xì)菌的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。同時(shí)提取各樣本上經(jīng)處理后的DNA，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)確定各組處理后所余細(xì)菌的數(shù)量。結(jié)果表明5.25% NaClO+Er:YAG組在30s和3min時(shí)與陽(yáng)性對(duì)照組的效果相當(dāng)，而在1min時(shí)效果優(yōu)于5.25%NaClO組。而0.5% NaClO+Er:YAG組和SAEW+Er:YAG組雖然30s時(shí)殺菌效果略次于5.