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文檔簡(jiǎn)介
1、第一部分、急性水腫型及急性壞死型胰腺炎大鼠模型的制作。 目的:建立簡(jiǎn)便、易復(fù)制、重復(fù)性好的急性水腫型胰腺炎(AEP)和急性壞死型胰腺炎(ANP)模型,為實(shí)驗(yàn)的第二部分、第三部分和第四部分提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。 方法:40只健康雄性SD大鼠,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組、AEP組、ANP組,每組10只。AEP組腹腔注射雨蛙素,40ug/kg,共2次,第一次注射后12小時(shí)造模成功。ANP組腹腔注射精氨酸,2g/kg,共2次,第一
2、次注射后24小時(shí)造模成功。正常對(duì)照組未做任何處理,假手術(shù)組給予同等劑量的生理鹽水腹腔注射。各組大鼠于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)檢測(cè)血清淀粉酶(AMY)、胰腺/體重比值以及胰腺組織病理學(xué)變化。 結(jié)果:AEP組和ANP組大鼠AMY均較對(duì)照組、假手術(shù)組明顯升高,ANP組升高更明顯(P<0.001);胰腺/體重比值也顯著升高,ANP組胰腺重量增加更明顯,與AEP組比較也有顯著增加(P<0.05);兩組的胰腺組織病理檢查顯示,AEP組大鼠胰腺組織表現(xiàn)為明
3、顯水腫, 胰腺葉間隔、小葉間隔間隙增大,炎性細(xì)胞浸潤(rùn),腺泡水腫明顯;ANP組大鼠胰腺葉間隔、小葉間隔間隙增大,炎性細(xì)胞浸潤(rùn),腺泡水腫,部分壞死,小葉結(jié)構(gòu)破壞,可見實(shí)質(zhì)內(nèi)出血。 結(jié)論:雨蛙素40ug/kg兩次和精氨酸2g/kg兩次腹腔注射,可以誘發(fā)大鼠AEP和ANP,此兩種動(dòng)物模型操作簡(jiǎn)便,容易復(fù)制,重復(fù)性好,模型形成迅速。 第二部分、抵抗素在不同類型急性胰腺炎發(fā)病機(jī)制中的作用。 目的:觀察血清中抵抗素在AEP和
4、ANP中的變化,抵抗素與細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、CRP以及抵抗素與急性胰腺炎(AP)嚴(yán)重程度的關(guān)系,闡明抵抗素在AP發(fā)病機(jī)制中的作用。 方法:40只健康雄性SD大鼠,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組、AEP組、ANP組,每組10只。采用雨蛙素腹腔注射誘導(dǎo)AEP模型,精氨酸腹腔注射誘導(dǎo)ANP模型,各組于造模成功后處死大鼠,觀察大鼠血清中抵抗素、TNF-α、IL-1β、CRP水平變化,檢測(cè)胰腺/體重比值、胰腺組織病理變化,抵抗素
5、在胰腺組織內(nèi)的免疫組化定位,用熒光實(shí)時(shí)定量PCR (realtime-PCR)法檢測(cè)胰腺組織抵抗素mRNA水平。 結(jié)果:AEP組和ANP組大鼠血清AMY、抵抗素、TNF-α、IL-1β、CRP水平均明顯升高(P<0.01),在ANP組中升高更明顯,統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著(P<0.01)。AEP組和ANP組大鼠抵抗素mRNA水平較對(duì)照組、假手術(shù)組明顯升高,統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著(P<0.01),ANP組較AEP組也明顯升高,統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著(
6、P<0.05)。血清抵抗素水平與血清TNF-α、IL-1β、CRP水平和胰腺組織病理評(píng)分呈正相關(guān)性,血清CRP水平和胰腺組織病理評(píng)分也呈正相關(guān)性。抵抗素在胰腺組織內(nèi)主要定位于胰腺腺細(xì)胞的胞漿內(nèi)。 結(jié)論:在胰腺組織中存在抵抗素,在AP發(fā)病時(shí)被激活,并進(jìn)一步激活TNF-α、IL-1β,共同參與了AP的發(fā)病機(jī)制;抵抗素與CRP及胰腺組織病理評(píng)分相關(guān),說(shuō)明抵抗素與胰腺炎的病情程度呈正相關(guān)。 第三部分、在急性胰腺炎中重組抵抗素對(duì)細(xì)
7、胞因子TNF-α、IL-1β的影響。 目的:觀察在AEP和ANP中,重組抵抗素對(duì)細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β的影響,進(jìn)一步闡明抵抗素在AP發(fā)病機(jī)制中的作用。 方法:40只健康雄性SD大鼠,隨機(jī)分為AEP組、AEP加抵抗素組、ANP組、ANP加抵抗素組,每組10只。采用雨蛙素腹腔注射誘導(dǎo)AEP模型,精氨酸腹腔注射誘導(dǎo)ANP模型,各組于造模成功后,AEP+抵抗素組和ANP+抵抗素組予以尾靜脈注射重組抵抗素蛋白,AEP組和A
8、NP組予以尾靜脈注射同等劑量的生理鹽水,觀察大鼠血清中TNF-α、IL-1β變化。 結(jié)果:在AEP組和AEP加抵抗素組、ANP組和ANP加抵抗素組相比,大鼠血清TNF-α、IL-1β水平明顯升高,統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著(P<0.01)。 結(jié)論:在AP發(fā)病時(shí),重組抵抗素能進(jìn)一步加強(qiáng)細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β的釋放,加重AP的病情。 第四部分、羅格列酮對(duì)急性壞死性胰腺炎及合并肺損傷的防治作用。 目的:研究PPA
9、R-γ配體的激動(dòng)劑(羅格列酮)對(duì)ANP及合并肺損傷大鼠是否有保護(hù)作用。 方法:40只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組,正常對(duì)照組、ANP組、羅格列酮預(yù)防組,羅格列酮治療組。采用大劑量精氨酸腹腔注射誘導(dǎo)ANP模型,預(yù)防組于造模前60分鐘給予羅格列酮10mg/kg,兩次,每次間隔1小時(shí),治療組于造模后30分鐘給予羅格列酮10mg/kg,兩次,每次間隔1小時(shí)。各組于造模后24小時(shí)處死大鼠,觀察大鼠血清抵抗素、AMY、TNF-α、IL-1β
10、和CRP水平變化,檢測(cè)肺組織髓過(guò)氧化物酶(MPO)、肺濕/干重比值、胰腺/體重比值、胰腺和肺組織病理變化,realtime-PCR法檢測(cè)胰腺組織中抵抗素mRNA的水平。 結(jié)果:ANP組抵抗素、AMY、TNF-α、IL-1β、CRP、胰腺/體重比值、肺組織MPO、肺濕/干重比值均較對(duì)照組明顯升高(P<0.01);胰腺組織中抵抗素mRNA的水平也較對(duì)照組升高(P<0.01),羅格列酮預(yù)防和治療組血清AMY、TNF-α、IL-1β、C
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