抵抗素在急性胰腺炎發(fā)病機(jī)制中的作用及羅格列酮防治作用的研究.pdf

1、第一部分、急性水腫型及急性壞死型胰腺炎大鼠模型的制作。 目的：建立簡(jiǎn)便、易復(fù)制、重復(fù)性好的急性水腫型胰腺炎（AEP）和急性壞死型胰腺炎（ANP）模型，為實(shí)驗(yàn)的第二部分、第三部分和第四部分提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。 方法：40只健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組、AEP組、ANP組，每組10只。AEP組腹腔注射雨蛙素，40ug/kg，共2次，第一次注射后12小時(shí)造模成功。ANP組腹腔注射精氨酸，2g/kg，共2次，第一

2、次注射后24小時(shí)造模成功。正常對(duì)照組未做任何處理，假手術(shù)組給予同等劑量的生理鹽水腹腔注射。各組大鼠于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)檢測(cè)血清淀粉酶（AMY）、胰腺/體重比值以及胰腺組織病理學(xué)變化。 結(jié)果：AEP組和ANP組大鼠AMY均較對(duì)照組、假手術(shù)組明顯升高，ANP組升高更明顯（P<0．001）；胰腺/體重比值也顯著升高，ANP組胰腺重量增加更明顯，與AEP組比較也有顯著增加（P<0．05）；兩組的胰腺組織病理檢查顯示，AEP組大鼠胰腺組織表現(xiàn)為明

3、顯水腫， 胰腺葉間隔、小葉間隔間隙增大，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腺泡水腫明顯；ANP組大鼠胰腺葉間隔、小葉間隔間隙增大，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腺泡水腫，部分壞死，小葉結(jié)構(gòu)破壞，可見實(shí)質(zhì)內(nèi)出血。 結(jié)論：雨蛙素40ug/kg兩次和精氨酸2g/kg兩次腹腔注射，可以誘發(fā)大鼠AEP和ANP，此兩種動(dòng)物模型操作簡(jiǎn)便，容易復(fù)制，重復(fù)性好，模型形成迅速。 第二部分、抵抗素在不同類型急性胰腺炎發(fā)病機(jī)制中的作用。 目的：觀察血清中抵抗素在AEP和

4、ANP中的變化，抵抗素與細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、CRP以及抵抗素與急性胰腺炎（AP）嚴(yán)重程度的關(guān)系，闡明抵抗素在AP發(fā)病機(jī)制中的作用。 方法：40只健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組、AEP組、ANP組，每組10只。采用雨蛙素腹腔注射誘導(dǎo)AEP模型，精氨酸腹腔注射誘導(dǎo)ANP模型，各組于造模成功后處死大鼠，觀察大鼠血清中抵抗素、TNF-α、IL-1β、CRP水平變化，檢測(cè)胰腺/體重比值、胰腺組織病理變化，抵抗素

5、在胰腺組織內(nèi)的免疫組化定位，用熒光實(shí)時(shí)定量PCR （realtime-PCR）法檢測(cè)胰腺組織抵抗素mRNA水平。 結(jié)果：AEP組和ANP組大鼠血清AMY、抵抗素、TNF-α、IL-1β、CRP水平均明顯升高（P<0．01），在ANP組中升高更明顯，統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著（P<0．01）。AEP組和ANP組大鼠抵抗素mRNA水平較對(duì)照組、假手術(shù)組明顯升高，統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著（P<0．01），ANP組較AEP組也明顯升高，統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著（

6、P<0．05）。血清抵抗素水平與血清TNF-α、IL-1β、CRP水平和胰腺組織病理評(píng)分呈正相關(guān)性，血清CRP水平和胰腺組織病理評(píng)分也呈正相關(guān)性。抵抗素在胰腺組織內(nèi)主要定位于胰腺腺細(xì)胞的胞漿內(nèi)。 結(jié)論：在胰腺組織中存在抵抗素，在AP發(fā)病時(shí)被激活，并進(jìn)一步激活TNF-α、IL-1β，共同參與了AP的發(fā)病機(jī)制；抵抗素與CRP及胰腺組織病理評(píng)分相關(guān)，說(shuō)明抵抗素與胰腺炎的病情程度呈正相關(guān)。 第三部分、在急性胰腺炎中重組抵抗素對(duì)細(xì)

7、胞因子TNF-α、IL-1β的影響。 目的：觀察在AEP和ANP中，重組抵抗素對(duì)細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β的影響，進(jìn)一步闡明抵抗素在AP發(fā)病機(jī)制中的作用。 方法：40只健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分為AEP組、AEP加抵抗素組、ANP組、ANP加抵抗素組，每組10只。采用雨蛙素腹腔注射誘導(dǎo)AEP模型，精氨酸腹腔注射誘導(dǎo)ANP模型，各組于造模成功后，AEP+抵抗素組和ANP+抵抗素組予以尾靜脈注射重組抵抗素蛋白，AEP組和A

8、NP組予以尾靜脈注射同等劑量的生理鹽水，觀察大鼠血清中TNF-α、IL-1β變化。 結(jié)果：在AEP組和AEP加抵抗素組、ANP組和ANP加抵抗素組相比，大鼠血清TNF-α、IL-1β水平明顯升高，統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異顯著（P<0．01）。 結(jié)論：在AP發(fā)病時(shí)，重組抵抗素能進(jìn)一步加強(qiáng)細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β的釋放，加重AP的病情。 第四部分、羅格列酮對(duì)急性壞死性胰腺炎及合并肺損傷的防治作用。 目的：研究PPA

9、R-γ配體的激動(dòng)劑（羅格列酮）對(duì)ANP及合并肺損傷大鼠是否有保護(hù)作用。 方法：40只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組，正常對(duì)照組、ANP組、羅格列酮預(yù)防組，羅格列酮治療組。采用大劑量精氨酸腹腔注射誘導(dǎo)ANP模型，預(yù)防組于造模前60分鐘給予羅格列酮10mg/kg，兩次，每次間隔1小時(shí)，治療組于造模后30分鐘給予羅格列酮10mg/kg，兩次，每次間隔1小時(shí)。各組于造模后24小時(shí)處死大鼠，觀察大鼠血清抵抗素、AMY、TNF-α、IL-1β

10、和CRP水平變化，檢測(cè)肺組織髓過(guò)氧化物酶（MPO）、肺濕/干重比值、胰腺/體重比值、胰腺和肺組織病理變化，realtime-PCR法檢測(cè)胰腺組織中抵抗素mRNA的水平。 結(jié)果：ANP組抵抗素、AMY、TNF-α、IL-1β、CRP、胰腺/體重比值、肺組織MPO、肺濕/干重比值均較對(duì)照組明顯升高（P<0．01）；胰腺組織中抵抗素mRNA的水平也較對(duì)照組升高（P<0．01），羅格列酮預(yù)防和治療組血清AMY、TNF-α、IL-1β、C