山東省農(nóng)村已婚育齡婦女RTI干預與病原體篩查方法研究.pdf

1、研究背景生殖道感染(Reproductive tract infection，RTI)己成為全球特別是發(fā)展中國家非常重要的生殖健康和公共衛(wèi)生問題。采取有效的干預措施預防和控制RTI的發(fā)生和流行，減少RTI的損失己成為全球的共識。國家計生委本著“以人為本”的原則，將RTI的防治工作作為全系統(tǒng)戰(zhàn)略發(fā)展的重點工程，于2001年下半年開始先后在全國20個省市區(qū)開展試點工作。各個試點區(qū)開展了一系列的RTI研究工作，但這些研究多是橫斷面的研究，目的

2、多在于了解RTI患病及相關(guān)知識、態(tài)度和行為的現(xiàn)狀。有的地區(qū)也開展了一定范圍內(nèi)的干預研究，其中涉及的干預手段有健康促進(包括健康教育)，篩查和查找病例，治療以及臨床病例管理，且大多集中在城市與流動人口，而針對農(nóng)村已婚育齡婦女RTI干預的研究少之又少。由于RTI大多無癥狀，加之具有癥狀多樣性與不典型性、多重感染與隱私等特點，致使很多感染者不能得到及時診治，因此開展RTI工干預模式研究十分必要。 同時目前對RTI多病原體的檢測方法不適

3、應流行病學大規(guī)模篩查和實驗診斷的需要，主要問題是各種病原體檢查需單一測定方法或試劑盒，需進行多次實驗方可對一份標本做出診斷，操作繁瑣，而且多數(shù)檢查費用昂貴，患者難以承受。在人群開展流行病學大規(guī)模調(diào)查更是困難，因此需要研究一種綜合性一次可以同時進行多病原體檢測的方法。 研究目的 主要目的 本研究旨在探索農(nóng)村已婚育齡婦女RTI綜合防治的可持續(xù)發(fā)展的模式，為減少RTI傳播制訂防治策略和進一步推廣提供依據(jù)。應用分子生物

4、學技術(shù)，建立用于常見RTI病原體檢測的多重PCR篩查方法。 具體目的 1、通過基線調(diào)查，了解農(nóng)村已婚育齡婦女RTI流行現(xiàn)狀。 2、分析農(nóng)村育齡婦女RTI的主要影響因素。 3、評價在農(nóng)村開展RTI社區(qū)干預對己婚育齡婦女RTI相關(guān)知識、態(tài)度、行為及RTI患病率的影響。 4、應用分子生物學技術(shù)，通過優(yōu)化多重PCR反應體系各組分，探索建立用于常見RTI病原體篩查方法。 研究方法 本研究為山東

5、省已婚育齡婦女RTI綜合防治干預示范工程的一部分，共包括兩部分。 1 第一部分 山東省農(nóng)村已婚育齡婦女RTI干預 應用描述性和分析性流行病學方法與現(xiàn)場干預方法，按經(jīng)濟發(fā)展水平與實驗檢驗條件選定四個縣市(章丘、諸城、岱岳與無棣)作為示范點，通過分層整群隨機抽樣方法，抽取農(nóng)村50歲以下已婚育齡婦女為研究對象。干預前通過結(jié)構(gòu)式問卷調(diào)查、婦科體檢和實驗室檢測進行RTI感染情況基線調(diào)查，并采用單因素、多因素Logistic回

6、歸分析RTI的主要危險因素，制訂干預措施，然后實施RTI綜合性干預措施。干預措施包括：①通過多種形式(VCD、廣播、發(fā)放宣傳材料、舉辦學習班)宣傳RTI防治知識，②促進性衛(wèi)生用品使用、健康衛(wèi)生行為建立和衛(wèi)生設(shè)施改進，⑧對基線調(diào)查中發(fā)現(xiàn)的RTI患者進行隨訪治療。干預一年后進行相應的調(diào)查，比較干預實施前后研究人群RTI知識、態(tài)度、行為以及RTI的患病率等方面的變化以評價干預效果。在調(diào)查中通過統(tǒng)一檢查方法、采集標本部位、檢驗試劑和判斷標準(常

7、見RTI疾病的診斷，按人民衛(wèi)生出版社第五版《婦科學》中RTI疾病的診斷標準)、培訓調(diào)查人員，制訂統(tǒng)一的調(diào)查表格等措施進行質(zhì)量控制。 2 第二部分 多重PCR篩查RTI病原體方法建立 應用分子生物學方法，通過正交試驗設(shè)計，對NG、CT、UU與Gv檢測的多重PCR體系中的引物濃度、模板DNA的量、Mg<'2+>與dNTP濃度、熱循環(huán)參數(shù)等條件進行優(yōu)化，并通過與單一PCR擴增結(jié)果比較以及對臨床標本的檢測，評價其靈敏度與特異度

8、，建立上述四種RTI常見病原體檢測的多重PCR體系。 采用FOXPRO進行數(shù)據(jù)錄入與整理，應用SPSS 100.0進行統(tǒng)計分析，主要統(tǒng)計分析方法包括描述性單因素分析、卡方檢驗和Logistic回歸模型分析等。 研究結(jié)果 第一部分 山東省農(nóng)村已婚育齡婦女RTI干預 1調(diào)查對象的基本情況：4個縣市基線調(diào)查共調(diào)查已婚育齡婦女5408人，干預1年后普查，參加全程觀察資料完整用于分析的為4482人，隨訪率為86.

9、04％。 2干預對婦女衛(wèi)生知識知曉率的影響分析干預前36.3％的人不知道避孕套具有預防疾病作用，干預后僅有6.9％的人不知道此作用；干預一年后，知道清洗會陰好處的有原來的79.9％上升到97.8％，知道性病具有傳染的由原來的57.7％上升為92.8％。 3干預對婦女個人衛(wèi)生、性衛(wèi)生習慣的影響 干預后婦女經(jīng)期使用衛(wèi)生巾或消毒衛(wèi)生紙的比例較干預前增加了約20％，清洗會陰部方法正確的由干預前的54.2％提高為79

10、.0％。干預后有70.2％人愿意使用避孕套，而實際只有9.7％的人比原來更多的使用了避孕套。干預后有65.8％和70.8％的婦女表示患病后能進行定期檢查和治療。 4干預對農(nóng)村已婚育齡婦女RTI患病率的影響 RTI總的患病率由干預前的46.6[％]下降為29.8％，下降了36.1％。其中同時患有二種RTI的患病率19．53％，三種RTI疾病患病率3.05％。念珠菌性陰道炎的患病率干預后下降了80.2％，細菌性陰道病的患

11、病率下降了28.0％，宮頸炎患病率下降了77.8％。。經(jīng)過一年隨訪治療，其中68.0％～96.0％的RTI疾病治愈。 已婚育齡婦女RTI病原體陽性檢出率中，滴蟲由3.7％下降為2.56％，白色念珠菌由7.O％下降為1.93％，線索細胞由10.4％下降為3.57％。 5 RTI的影響因素分析 在調(diào)整學歷、年齡和人均年收入后，分析發(fā)現(xiàn)與滴蟲、白色念珠菌和細菌性陰道病有關(guān)聯(lián)的危險因素為，初婚年齡、初次懷孕年齡、足月

12、產(chǎn)數(shù)、性病知識知曉。 對于宮頸糜爛，初婚年齡、初次懷孕年齡20歲以下分別與26歲及以上比較，調(diào)整的OR及OR95％CI分別為3.60(1.42～9.10)和5.64(1.27～24.96)。丈夫結(jié)婚次數(shù)2次及以上調(diào)整的OR及0A95％CI為2.47(1.42～4.29)。 人工流產(chǎn)史與RTI有關(guān)聯(lián)，OR為1.23，OR值的95％可信區(qū)間為1.06～1.43，并且隨著人工流產(chǎn)次數(shù)增多，RTI患病的危險性也增加。

13、 第二部分 多重PCR篩查NG、CT、UU與Gv的方法建立 采用L<,16>(4<'4>，2<'3>)進行正交實驗設(shè)計，研究的影響因素包括：引物配比(4個水平)、Mg<'2+>濃度(4個水平)、dNTP用量(4個水平)、DNA模板量(4個水平)、退火溫度(2個水平)、退火時間(2個水平)和延伸時間(2個水平)。 1 引物濃度、模板DNA的量 NG、CT、UU與Gv在多重PCR體系中的最佳引物濃度比率為：4：5

14、：6：3，當模板DNA在40μL的反應體系中增加為8μL時，擴增效果理想。 2 Mg<'2+>與dNTP濃度、熱循環(huán)參數(shù) 在40μL的反應體系中，當Mg<'2+>濃度為40mM、dNTP濃度為每種300μM時，采用94℃變性，54℃退火與10分鐘的延伸時間結(jié)果最好。 3 多重PCR特異性與靈敏度 經(jīng)多重PCR擴增后，可見NG、Gv、UU、CT相應的633bp、433bp、360bp、210bp預期的特異性

15、擴增片段，具有高的特異性。單一PCR和多重PCR在同一數(shù)量的擴增結(jié)果進行對比，其結(jié)果一致，混合感染的標本兩法均能檢測到同一稀釋度，為0.5pg。 應用單一PCR與多重PCR分別對48例臨床單純與混合感染標本進行檢測，對單純、雙重、三重與四重感染的標本，兩法的符合率分別為100％、100％、91.7％、91.7％。 結(jié)論 1 通過本次基線調(diào)查發(fā)現(xiàn)山東省農(nóng)村已婚育齡RTI疾病患病率為46.6％，病原體總的檢出率為36

16、.86％，其中居前三位的是滴蟲、白色念珠菌和線索細胞。 2 綜合干預一年后，農(nóng)村已婚育齡婦女RTI患病率下降了36.05％，滴蟲、白色念珠菌和細菌性陰道病的病原體檢出率分別下降30.81％、72.42％和65.7％，顯示干預效果非常明顯。 3 由于NG、UU、CT檢查費用高，而滴蟲、白色念珠菌和細菌性陰道病檢出方便，價格便宜。在農(nóng)村開展以衛(wèi)生宣教、婦科檢查和滴蟲、白色念珠菌和線索細胞鏡檢相結(jié)合的綜合防治方法是經(jīng)濟和可行的

17、。為了使廣大農(nóng)村婦女參與，保障RTI綜合防治持續(xù)發(fā)展，整合農(nóng)村醫(yī)療衛(wèi)生服務(wù)系統(tǒng)和計劃生育服務(wù)系統(tǒng)資源十分必要。 4 通過對RTI病原體引物的比例、模板DNA量、Mg<'2+>與dNTP濃度、熱循環(huán)參數(shù)等組分的優(yōu)化，建立了多重PCR檢測NG、Gv、UU、CT的方法。 意義與創(chuàng)新 本課題參照國家計生系統(tǒng)RTI工程方案，設(shè)計了山東省RTI干預工程，包括基線調(diào)查和干預方案，經(jīng)專家論證，統(tǒng)一問卷、臨床檢查和實驗方法的標準統(tǒng)

18、一培訓，資料樣本復核等質(zhì)量控制措施，總投資經(jīng)費150萬元，在山東省農(nóng)村四個縣市為試點地區(qū)，通過基線調(diào)查掌握了農(nóng)村已婚育齡婦女RTI的感染狀況及其危險因素。然后對農(nóng)村已婚育齡婦女進行衛(wèi)生知識、性衛(wèi)生知識和避孕措施等宣教，對經(jīng)體檢、實驗室檢查等發(fā)現(xiàn)的RTI病例進行系統(tǒng)、正規(guī)的診療等綜合干預，一年后，干預效果非常明顯。該研究表明將基層計劃生育技術(shù)服務(wù)和醫(yī)療服務(wù)有機結(jié)合是防治RTI的有效模式，必須將農(nóng)村目前計劃生育服務(wù)和醫(yī)療服務(wù)分離的體系整合，