人表皮生長因子(hEGF)在大腸桿菌中的表達及其多克隆抗體的制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、人表皮生長因子是由53個氨基酸組成的小分子量單鏈多肽類細胞因子,它對酸和熱穩(wěn)定。它的顯著生物學效應是能夠促進內外表皮細胞的生長,在臨床上可用于治療燒傷、創(chuàng)傷、角膜的移植、胃酸、十二指腸潰瘍等;還可用于化妝品。由于其具有特殊的生物學效應使其有很大的潛在經濟效益。 1960年Cohen首次從小鼠頜下腺中發(fā)現(xiàn)了表皮生長因子,之后的40幾年又陸續(xù)在人體和哺乳動物中發(fā)現(xiàn)了與表皮生長因子結構與性質相近的生長因子,轉化生長因子α(TGF α)

2、、牛痘病毒生長因子(VGF)、休普氏纖維瘤生長因子(SFGF)、粘液瘤生長因子(MGF)、兩性調節(jié)蛋白(ampiregulin)、雙向調節(jié)素(arnphiregtuli,AR)、表皮調節(jié)素(epiregulin,Epl)、結合肝素的EGF樣生長因子(HB-EGF)、痘苗病毒生長因子(VVGF)等,大小都在50~80個氨基酸之間,在一級結構上有20%~90%的同源性,它們都含有六個半胱氨酸,形成3對二硫鍵和表皮細胞生長因子受體結合且具有相

3、似的生物活性,構成了表皮生長因子家族。 本實驗運用PCR技術人工合成了人表皮生長因子hEGF的成熟肽DNA序列。將其克隆到pGEM-T載體上,測序正確后將其克隆至pGEX-2T融合表達載體上構建了重組質粒pGEX-2T-hEGF。經測序后正確的重組子轉化入BL21(DE3.0)表達宿主菌中,加入終濃度為1.0mM的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)誘導表達GST-

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