人表皮生長因子（hEGF）在大腸桿菌中的表達及其多克隆抗體的制備.pdf

1、人表皮生長因子是由53個氨基酸組成的小分子量單鏈多肽類細胞因子，它對酸和熱穩(wěn)定。它的顯著生物學效應是能夠促進內外表皮細胞的生長，在臨床上可用于治療燒傷、創(chuàng)傷、角膜的移植、胃酸、十二指腸潰瘍等；還可用于化妝品。由于其具有特殊的生物學效應使其有很大的潛在經濟效益。 1960年Cohen首次從小鼠頜下腺中發(fā)現(xiàn)了表皮生長因子，之后的40幾年又陸續(xù)在人體和哺乳動物中發(fā)現(xiàn)了與表皮生長因子結構與性質相近的生長因子，轉化生長因子α(TGF α)

2、、牛痘病毒生長因子(VGF)、休普氏纖維瘤生長因子(SFGF)、粘液瘤生長因子(MGF)、兩性調節(jié)蛋白(ampiregulin)、雙向調節(jié)素(arnphiregtuli，AR)、表皮調節(jié)素(epiregulin，Epl)、結合肝素的EGF樣生長因子(HB-EGF)、痘苗病毒生長因子(VVGF)等，大小都在50～80個氨基酸之間，在一級結構上有20％～90％的同源性，它們都含有六個半胱氨酸，形成3對二硫鍵和表皮細胞生長因子受體結合且具有相

3、似的生物活性，構成了表皮生長因子家族。 本實驗運用PCR技術人工合成了人表皮生長因子hEGF的成熟肽DNA序列。將其克隆到pGEM-T載體上，測序正確后將其克隆至pGEX-2T融合表達載體上構建了重組質粒pGEX-2T-hEGF。經測序后正確的重組子轉化入BL21(DE3.0)表達宿主菌中，加入終濃度為1.0mM的異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside，IPTG)誘導表達GST-