陜西五地土樣中昆蟲病原線蟲共生菌殺蟲殺菌活性菌株篩選及鑒定.pdf

1、昆蟲病原線蟲共生菌是存在于昆蟲病原線蟲腸道內(nèi)的菌革蘭氏陰性菌，屬腸桿菌科細(xì)菌Enterobacteriaceae，共包含致病桿菌屬Xenorhabdus和發(fā)光桿菌屬Photorhabdus，分別與斯氏線蟲Steinernematidae和異小桿線蟲Heterorhabditidae共生。昆蟲病原線蟲共生菌能產(chǎn)生多種代謝產(chǎn)物，在醫(yī)療衛(wèi)生和農(nóng)業(yè)上具有抑菌、殺蟲、殺線蟲、抗?jié)?、抗腫瘤和抗病毒等多種生物活性。國內(nèi)對昆蟲病原線蟲共生菌的研究較少

2、，主要集中在從國外引種、保種等工作上，關(guān)于昆蟲病原線蟲共生菌的分離鑒定工作的研究還不夠深入。本研究從陜西楊凌、太白、渭南、漢中、樓觀臺5地采集土樣500份，分離其中昆蟲病原線蟲，篩選昆蟲病原線蟲共生菌，在對共生菌的生物活性研究基礎(chǔ)上，確定了其種屬分類地位，研究得到如下主要結(jié)果： 1、對采自陜西楊凌、太白、渭南、漢中、樓觀臺等5地的500份土樣中的線蟲系統(tǒng)篩選結(jié)果表明，土樣線蟲含有率為95.6％，研究發(fā)現(xiàn)線蟲的分布與土壤質(zhì)地、土壤

3、濕度、土壤肥沃程度、植被、當(dāng)?shù)丶闹骷凹竟?jié)等因素有關(guān)；分離得到2種昆蟲病原線蟲；從2種昆蟲病原線蟲中篩選到2株共生菌，1株為Ⅰ型共生菌，1株為Ⅱ型共生菌，Ⅰ型共生菌為目標(biāo)菌株，命名為TB。 2、對菌株TB的殺蟲殺菌生物活性進行了較為系統(tǒng)研究。(1)殺菌活性。在離體條件下，采用生長速率法測定了TB菌株發(fā)酵液對11種病原真菌的生長抑制作用，TB菌株發(fā)酵液在稀釋10倍的條件下，對11種植物病原真菌有不同程度的抑菌活性，其中對辣椒疫霉病菌

4、、番茄灰霉病菌和小麥紋枯病菌的抑制作用最強，抑制率分別為99.99％、99.11％和99.99％；采用孢子萌發(fā)法測定昆蟲病原線蟲共生菌發(fā)酵液對番茄灰霉孢子萌發(fā)的抑制作用，實驗表明TB菌株發(fā)酵液對番茄灰霉病菌孢子萌發(fā)有推遲作用?；铙w實驗結(jié)果表明TB菌株濃縮5倍發(fā)酵液對小麥白粉病的保護效果達到43.8％，治療效果為30.6％。(2)殺蟲活性測定表明，TB菌株濃縮5倍發(fā)酵液對粘蟲和小菜蛾無明顯觸殺、胃毒活性，但對5齡粘蟲具有較強的血腔毒性，在

5、每頭注射10μL的劑量下，對5齡粘蟲的致死率為90％。 3、運用形態(tài)學(xué)、生理生化指標(biāo)測定、分子生物學(xué)等方法對菌株TB進行了鑒定。形態(tài)觀察和生理生化指標(biāo)測定結(jié)果可初步推斷TB菌株為致病桿菌屬(Xenorhabdus)細(xì)菌；經(jīng)PCR擴增TB菌株的16SrDNA，測得16SrDNA的全序列長度為1536個堿基，利用DNAMAN5.2.2軟件的MultipleSequenceAlignment進行多序列同源性分析，采用鄰接法構(gòu)建了TB菌