外源性bFGF對人涎腺腺樣囊性癌ACC-2細(xì)胞增殖的影響及相關(guān)機制研究.pdf

1、本文主要從以下三個部分展開論述：
　　第一部分：
　　目的：研究堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和成纖維細(xì)胞生長因子受體1(fibroblast growth factor receptor-1,FGFR1)在人涎腺腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)組織不同病理分型與對應(yīng)的癌旁組織中的表達(dá)特點及分布差異。
　　方法：收集

2、26例手術(shù)切除的人涎腺腺樣囊性癌組織標(biāo)本,并進行病理分型,采用其中對應(yīng)的癌旁組織17例作為正常對照。應(yīng)用免疫組化S-P法,檢測bFGF及其受體FGFR1在涎腺腺樣囊性癌組織不同病理分型及對應(yīng)的癌旁組織中的表達(dá),觀察其表達(dá)是否有所差異。
　　結(jié)果：bFGF及FGFR1在人涎腺腺樣囊性癌組織的細(xì)胞漿中有較強表達(dá),細(xì)胞漿呈棕黃色;在癌旁正常組織的細(xì)胞漿中表達(dá)程度明顯降低,細(xì)胞漿多不著色。腫瘤組織中的bFGF及FGFR1表達(dá)陽性率顯著高于

3、癌旁正常組織(P<0.05)。bFGF及FGFR1在腺樣囊性癌實性型中的表達(dá)明顯高于在篩孔型和管狀型中的表達(dá)(P<0.05)。
　　結(jié)論：bFGF及其受體FGFR1在人涎腺腺樣囊性癌組織與對應(yīng)的癌旁組織間確實存在表達(dá)水平的差異,并且與病理分型有關(guān),在分化程度差的實性型癌中表達(dá)高于分化較好的管狀型,篩孔型癌。提示bFGF及其受體FGFR1在人涎腺腺樣囊性癌的發(fā)生發(fā)展及分化中可能起重要作用。
　　第二部分：
　　目的：觀察

4、外源性堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)在不同濃度作用下對人涎腺腺樣囊性癌ACC-2細(xì)胞增殖的影響。
　　方法：培養(yǎng)人涎腺腺樣囊性癌ACC-2細(xì)胞并進行實驗分組,每組加入不同濃度外源性bFGF對細(xì)胞生長進行干預(yù)。實驗分組為空白對照組,給藥組:bFGF組(0.3×10-3、0.6×10-3、1.2×10-3 g/L),bFGF(0.6×10-3 g/L)+細(xì)胞增殖相關(guān)通路蛋白 MEK抑制劑U0126(0.1g/L)組。應(yīng)用MTT比色

5、法測定各個分組中不同濃度bFGF對ACC-2細(xì)胞增殖的影響。
　　結(jié)果：MTT比色法結(jié)果顯示,以空白組作為對照,bFGF組的ACC-2細(xì)胞增殖率明顯增高,隨著bFGF的給藥濃度增加,細(xì)胞增殖率隨之升高,bFGF(1.2×10-3 g/L)組的細(xì)胞增殖率最高。而bFGF(0.6×10-3 g/L)+U0126(0.1g/L)組的細(xì)胞增殖率明顯低于bFGF(0.6×10-3 g/L)組(P<0.05)。
　　結(jié)論：外源性bFGF

6、能明顯提高ACC-2細(xì)胞的增殖率,促進ACC-2細(xì)胞的生長。而加入細(xì)胞增殖相關(guān)通路蛋白MEK抑制劑U0126,可降低這一效應(yīng)。提示bFGF可能在涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞的增殖過程中起重要作用。bFGF可能以自分泌的方式,通過影響腫瘤細(xì)胞增殖相關(guān)通路發(fā)揮作用,刺激癌細(xì)胞異常分裂和增殖。
　　第三部分：
　　目的：觀察外源性堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)促進人涎腺腺樣囊性癌ACC-2細(xì)胞增殖與細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracell

7、ular signal-regulated kinase, ERK)通路的關(guān)系。
　　方法：培養(yǎng)人涎腺腺樣囊性癌ACC-2細(xì)胞并進行實驗分組,每組加入不同濃度外源性bFGF對細(xì)胞生長進行干預(yù)。實驗分組為空白對照組,給藥組:bFGF組(0.3×10-3、0.6×10-3、1.2×10-3 g/L),bFGF(0.6×10-3 g/L)+U0126(0.1g/L)組。提取各組細(xì)胞蛋白,采用放免標(biāo)記法測定各組細(xì)胞的ERK活性。采用蛋白質(zhì)

8、免疫印跡法(Western blot)測定各組細(xì)胞的ERK通路相關(guān)信號分子p-MEK1/2、p-ERK1/2、MKP-1、Cyclin D1及p21waf/cip1的蛋白表達(dá)。采用細(xì)胞免疫熒光雙標(biāo)記法檢測bFGF(1.2μg/ml)組中細(xì)胞的MEK1/2、MKP-1表達(dá)。
　　結(jié)果：放免標(biāo)記結(jié)果顯示bFGF組ACC-2細(xì)胞的ERK活性較對照組明顯升高。而bFGF+U0126組細(xì)胞的ERK活性明顯低于bFGF組(P<0.05)。蛋白

9、免疫印跡法(Western blot)結(jié)果顯示bFGF顯著增強ACC細(xì)胞的p-MEK1/2、p-ERK1/2、Cyclin D1蛋白表達(dá)及抑制MKP-1、p21waf/cip1蛋白表達(dá)。隨bFGF濃度增加,此效應(yīng)更為加強。而U0126可抑制這種效應(yīng)(P<0.05)。細(xì)胞免疫熒光雙標(biāo)記法結(jié)果顯示bFGF(1.2μg/ml)作用于ACC-2細(xì)胞株后,MEK1/2表達(dá)明顯上調(diào),而MKP-1表達(dá)明顯抑制。
　　結(jié)論：外源性bFGF可以明顯