GBS相關空腸彎曲菌脂多糖抗體及其抗獨特型抗體的研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學碩士學位論文GBS相關空腸彎曲菌脂多糖抗體及其抗獨特型抗體的研究姓名：趙哲申請學位級別：碩士專業(yè)：神經病學指導教師：郭力李春巖20040301中文摘要就提供了一種不用cj菌檢測Cj相關GBS新檢測方法。在組織學中可以用Aid檢測抗體Id的存在及定位。還可用來清除體內的LPS抗體，或在動物實驗中做干預。方法：厭氧培養(yǎng)Pennor0：19型空腸彎曲菌，酚一水法提取LPS，DNase，RNase，ProteinaseK消化混合物中

2、的DNA，RNA及蛋白質。銀染和考馬斯亮藍染色鑒定所提LPS純度。LPS用包被稀釋液稀釋致10ug／ml，包被酶標板，2％牛血清白蛋白封閉，檢測5位GBS患者血漿LPS抗體，選取LPS抗體陽性血漿。將Sepharose4FastFlow介質裝入柱中，用冰lmMHCl溶脹，少量，多次入柱，最后一次把HCl徹底放干凈，防止殘留的HCl影響下一部偶聯(lián)過程的PH值。預先將LPS溶于偶聯(lián)緩沖液中，立即將LFS溶液加入柱中，不斷上下顛倒晃動，室溫2

3、～4h。Tris緩沖液多次少量入柱，以封閉介質中未被偶聯(lián)的活性基團，室溫2h。TrisHCl緩沖液和乙酸緩沖液反復交替入柱，以洗去結合不牢固的LPS。GBS患者(ELISA檢測LFS抗體陽性)血漿用022urn濾膜過濾，以除去顆粒性物質，防止堵塞介質的孔徑。血漿入柱，為保證抗原抗體反應充分，保持緩慢流出。血漿過完后用PB緩沖液沖柱。這時血漿中的抗體被偶聯(lián)在介質上的LPS所吸附。緩慢加入3MKSCN以解離吸附的抗體，收集解離液，每Iml收