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文檔簡介
1、目的:通過觀察不同濃度咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester, CAPE)處理的人結(jié)腸癌HT-29細胞中FAK、ERK及Caspase-3mRNA和蛋白表達水平變化,探討 CAPE誘導(dǎo)結(jié)腸癌細胞凋亡的作用機制。
方法:體外培養(yǎng)HT-29細胞至對數(shù)生長期后予細胞種板,用10μg/ml的CAPE處理體外培養(yǎng)的結(jié)腸癌HT-29細胞后,用無CAPE處理組和DMSO組作對照,采用免疫組織化學(xué)方法檢測FAK
2、和ERK蛋白表達變化;用不同濃度的CAPE(2.5、5.0、7.5、10μg/ml)處理體外培養(yǎng)的人結(jié)腸癌HT-29細胞后,用無CAPE處理組和DMSO組作對照,應(yīng)用RT-PCR法檢測FAK、ERK和Caspase-3mRNA表達水平。
結(jié)果:1.免疫組織化學(xué)方法顯示:人結(jié)腸癌HT-29細胞中FAK和ERK蛋白表達均為陽性,定位于細胞漿,經(jīng)10.0μg/ml的CAPE作用于HT-29細胞24h后,F(xiàn)AK和ERK蛋白表達減少,與
3、對照組間比較差異有顯著性(P<0.05或0.01);2. RT-PCR結(jié)果顯示,經(jīng)2.5、5.0、7.5和10.0μg/ml的CAPE作用于HT-29細胞24h后,F(xiàn)AK和ERK mRNA表達隨CAPE濃度的增加而下降,Caspase-3 mRNA隨CAPE濃度的增加而上升。
結(jié)論:CAPE誘導(dǎo)HT-29細胞的作用可能與其下調(diào)FAK、ERKmRNA和蛋白表達,上調(diào) Caspase-3mRNA的表達,從而干擾 FAK-Ras-M
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