人肝癌細胞總RNA電轉(zhuǎn)染樹突狀細胞的抗腫瘤研究.pdf

1、目的：探討人肝癌細胞總RNA電轉(zhuǎn)染人樹突狀細胞(DC)后能否誘導出特異性的效應T細胞；觀察電轉(zhuǎn)染前后和成熟前后的樹突狀細胞表面形態(tài)學及蛋白表達變化；分析人肝癌細胞總RNA電轉(zhuǎn)染樹突狀細胞并誘導特異性的效應T細胞抗人肝癌的特異性，為樹突狀細胞抗腫瘤的臨床應用提供理論基礎。 方法：通過密度梯度離心法分離人外周血的單核細胞，采用細胞因子體外培養(yǎng)誘導其分化為未成熟樹突狀細胞(imDC)和成熟樹突狀細胞(mDC)。采用Wright-Gim

2、sa染色、免疫細胞化學、酶細胞化學檢測、光學顯微鏡、倒置顯微鏡、透射電子顯微鏡和掃描電子顯微鏡觀察單核細胞、未成熟樹突狀細胞、成熟樹突狀細胞形態(tài)及其表面標志等。 培養(yǎng)人肝癌細胞株Bel-7402，采用Wright-Gimsa染色、倒置顯微鏡、免疫細胞化學觀察人肝癌細胞形態(tài)及其表面標志。Trizol一步法提取人肝癌細胞總RNA。檢測其完整性和純度。 通過電轉(zhuǎn)染法將人肝癌細胞總RNA導入未成熟樹突狀細胞內(nèi)；觀測電轉(zhuǎn)染樹突狀細

3、胞的轉(zhuǎn)染率及臺盼藍檢測電轉(zhuǎn)24h后細胞的死亡率；電轉(zhuǎn)染后的未成熟樹突狀細胞形態(tài)及其表面標志并與電轉(zhuǎn)染前作比較。 從人外周血分離出T細胞，采用Wright-Gimsa染色、免疫細胞化學、酶細胞化學檢測細胞形態(tài)及其表面標志等。通過T細胞增殖實驗和混合淋巴細胞反應，獲取人肝癌細胞RNA電轉(zhuǎn)染的樹突狀細胞所激活的特異性效應T細胞，用MTT法測定T細胞增殖率。 通過效應T細胞分別與人肝癌細胞和人骨肉瘤細胞(MG-63)混合培養(yǎng)，用