血管平滑肌細胞中AT-,1-受體偶聯蛋白質的鑒定.pdf

1、本研究通過血管緊張素Ⅱ刺激血管平滑肌細胞(VSMC)，篩選血管緊張素Ⅱ 1型受體(AT<,1>受體)相互偶聯的蛋白質，以發(fā)現新的AT<,1>受體偶聯蛋白質；同時觀察有無血管緊張素Ⅱ刺激的VSMC中AT<,1>受體偶聯蛋白質表達的差異，探討影響AT<,1>受體介導的信號通路及受體調節(jié)可能的機制。 方法：將引產胎兒的主動脈VSMC原代培養(yǎng)并傳至6-8代用于實驗。按平行對照一組細胞加血管緊張素Ⅱ刺激(實驗組)和另一組細胞不加血管緊張素

2、Ⅱ刺激(對照組)。兩組同時提取細胞總蛋白后，用免疫共沉淀及SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)方法分離AT<,1>受體偶聯蛋白質。從膠中切取實驗組顯色的蛋白質條帶及對照組相應位置的凝膠，進行電噴霧串聯質譜(ESI-MS／MS)分析，通過搜索數據庫鑒定和比較兩組AT<,1>受體偶聯蛋白質的異同。在此基礎上，采甩免疫共沉淀和Western blot分析技術對AT<,1>受體偶聯蛋白質進行驗證。 結果：實驗組分離鑒定了14個

3、AT<,1>受體偶聯蛋白質。分別是2個波形蛋白；角蛋白25A；肌動蛋白γ-1和5個類肌動蛋白；異三聚體G蛋白成員中的2個Gq／11α亞單位；ADP／ATP轉運蛋白；AT<,1>受體相關蛋白(Type-1 angiotensin Ⅱ receptor-associated protein，ATRAP)及硫氧還蛋白。進一步Western blot技術驗證了鑒定蛋白質中硫氧還蛋白在血管緊張素Ⅱ刺激后與AT<,1>受體相偶聯。而對照組只鑒定出其

4、中的6個AT<,1>受體偶聯蛋白質：2個波形蛋白、角蛋白25A、2個Gq／11 α亞單位和ATRAP。本實驗分離鑒定的波形蛋白、角蛋白25A、肌動蛋白、類肌動蛋白、ADP／ATP轉運蛋白和硫氧還蛋白是文獻尚未報道的新的AT<,1>受體偶聯蛋白。 結論：實驗組分離鑒定出14個AT<,1>受體偶聯蛋白，其中波形蛋 白、角蛋白25A、肌動蛋白、類肌動蛋白、ADP／ATP轉運蛋白和硫 氧還蛋白是文獻尚未報道的新的AT<,1>受體偶聯