B類I型清道夫受體在小型豬及HepG2、THP-1細胞中表達的變化.pdf

1、B類Ⅰ型清道夫受體(scavengerreceptorclassBtypeⅠ，SR-BI)是第一個在分子水平上證實的位于細胞膜表面的高密度脂蛋白(highdensitylipoprotein，HDL)受體。SR-BI有多種配體，它可以介導(dǎo)膽固醇和其他脂質(zhì)在HDL和細胞之間進行轉(zhuǎn)運[1][2]。逆向膽固醇轉(zhuǎn)運(reversecholesteroltransport，RCT)是HDL介導(dǎo)的一種從外周組織向肝臟轉(zhuǎn)運多余膽固醇的過程[3]。RC

2、T在體內(nèi)有多個步驟，其中第一步就是肝外組織細胞中的未酯化膽固醇流出到HDL，而最后一步則是HDL中的膽固醇酯經(jīng)選擇性吸收而轉(zhuǎn)運到肝臟的過程[4]。作為HDL的唯一受體，SR-BI在RCT中起著十分重要的作用。本研究擬在動脈粥樣硬化小型豬模型上觀察肝臟和血管SR-BI表達的變化，然后采用ox-LDL、LDL及HDDL別處理肝HepG2細胞和肝外THP-1巨噬細胞，觀察細胞水平上SR-BI的表達及細胞內(nèi)膽固醇轉(zhuǎn)運的變化，為進一步闡明SR-B

3、I在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用提供實驗依據(jù)?！　〉谝徊糠郑簞用}粥樣硬化小型豬SR-BI表達的變化。目的：探討動脈粥樣硬化小型豬肝臟和主動脈組織中SR-BI表達的變化。方法：采用飼喂高脂高膽固醇飼料的貴州小香豬為研究對象，喂養(yǎng)12個月后處死動物，采用油紅O和HE染色檢測肝臟蓄脂情況及動脈粥樣斑塊病變，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、Western印跡和免疫組織化學法分別檢測肝臟和主動脈組織中SR-BImRNA和蛋白質(zhì)的表達。結(jié)果

4、：油紅O及HE染色可見動脈粥樣硬化小型豬肝臟有大量的脂肪空泡，動脈有明顯的脂質(zhì)條紋及斑塊。采用RT-PCR、Western印跡與免疫組織化學分別檢測組織SR-BImRNA和蛋白質(zhì)的表達，結(jié)果顯示，與對照組小型豬比較，動脈粥樣硬化小型豬肝組織和主動脈組織的SR-BImRNA及蛋白質(zhì)的表達上調(diào)(P＜0.05)。結(jié)論：高脂高膽固醇飲食上調(diào)小型豬肝組織和主動脈組織SR-BI的表達?！　〉诙糠郑篛X-LDL、LDL和HDL對HepG2細胞與T

5、HP-1巨噬細胞SR-BI表達的影響。目的：研究ox-LDL、LDL和HDL對HepG2細胞和THP-1巨噬細胞SR-BI表達及細胞內(nèi)膽固醇轉(zhuǎn)運的影響。方法：用50μg/ml的氧化低密度脂蛋白(oxidizedlowdensitylipoprotein，ox-LDU、低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein，LDL)和HDL分別處理HepG2細胞，采用油紅O染色檢測HepG2細胞中脂質(zhì)的蓄積情況，用液體閃爍計數(shù)法檢測He

6、pG2細胞膽固醇的流入，高效液相色譜法檢測HepG2細胞中總膽固醇含量，用RT-PCR、Western印跡法分別檢測HepG2細胞中SR-BImRNA和蛋白質(zhì)的表達。THP-1細胞用160nmol/L佛波酯孵育24h，誘導(dǎo)分化成巨噬細胞后，再用50μg/ml的ox-LDL、LDL和HDL分別處理，用RT-PCR、Western印跡法分別檢測THP-1巨噬細胞上SR-BImRNA和蛋白質(zhì)的表達。最后，分別用50、100、150μg/ml的

7、HDL與50μg/ml的ox-LDL與THP-1巨噬細胞共同孵育，用液體閃爍計數(shù)法檢測THP-1巨噬細胞膽固醇的流出，RT-PCR、Western印跡法分別檢測THP-1巨噬細胞中SR-BImRNA和蛋白質(zhì)的表達。　　結(jié)果：用50μg/ml的ox-LDL、LDL、HDL處理HepG2細胞24h后，與對照組相比，油紅O染色發(fā)現(xiàn)各脂蛋白處理組的HepG2細胞中脂滴均增多，以HDL處理組增加最為明顯；液體閃爍計數(shù)法檢測到各脂蛋白處理組的He

8、pG2細胞膽固醇的流入增加，以HDL組最為明顯，達到32.68％；高效液相色譜法檢測到對照組細胞內(nèi)總膽固醇含量為43.18±7.80mg/g蛋白，而ox-LDL、LDL、HDL處理組的HepG2細胞中總膽固醇含量分別為113.01±15.90、171.13±20.01、220.39±28.00mg/g蛋白；RT-PCR、Western印跡法分別檢測到各脂蛋白處理組的HepG2細胞中SR-BImRNA和蛋白質(zhì)的表達均增高。THP-1巨噬細

9、胞用510μg/ml的ox-LDL、LDL、HDL處理24h后，RT-PCR、Western印跡法檢測發(fā)現(xiàn)，ox-LDL可以下調(diào)THP-1巨噬細胞中SR-BImRNA和蛋白質(zhì)的表達，LDL的作用不明顯，而HDL則可以上調(diào)THP-1巨噬細胞中SR-BImRNA和蛋白質(zhì)的表達。再分別用50、100、150μg/ml的HDL與50μg/ml的ox-LDL和THP-1巨噬細胞共同孵育，液體閃爍計數(shù)法檢測發(fā)現(xiàn)ox-LDL減少THP-1巨噬細胞中膽

10、固醇的流出，HDL可以增加THP-1巨噬細胞膽固醇的流出；RT-PCR、Western印跡法檢測發(fā)現(xiàn)HDL可以上調(diào)THP-1巨噬細胞中SR-BImRNA和蛋白質(zhì)的表達，HDL的這些效應(yīng)都呈濃度依賴性。結(jié)論：結(jié)果提示，ox-LDL、LDL、HDL可以上調(diào)HepG2細胞上SR-BI的表達，并增加細胞內(nèi)膽固醇的含量；ox-LDL下調(diào)THP-1巨噬細胞SR-BI的表達，促進巨噬細胞內(nèi)膽固醇蓄積；HDL則可以上調(diào)THP-1巨噬細胞SR-BI的表達