抑制性差減雜交結合cDNA芯片篩選家兔高脂血癥及動脈粥樣硬化相關基因.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、　　本研究為了探尋與AS發(fā)生發(fā)展相關的調節(jié)脂質代謝、氨基酸代謝、糖代謝、炎癥反應、免疫應答、變態(tài)反應等的肝臟差異表達基因，明確肝臟在高脂血癥和AS發(fā)生中的作用。方法：通過給新西蘭白兔喂飼高膽固醇飲食復制高脂血癥-As動物模型。根據其血清膽固醇含量分為敏感組和不敏感組。分別取兩組動物的肝臟，抽提總RNA，并分離mRNA，以造型敏感組為受檢者(tester)、造型不敏感組為驅動者(driver)，進行正向SSH；在反向SSH中則相反。經兩輪

2、雜交及兩次抑制性PCR，將產物與T/A載體連接構建cDNA差減文庫，并轉化大腸桿菌進行文庫擴增?！　⊙芯繎肳estern印跡觀察敏感組和不敏感組差異基因熱休克蛋白70(HSP70)的蛋白表達情況。應用原位雜交技術鑒定HSP70在造型動物肝臟的細胞定位。ELISA檢測血清HSP70表達。運用Western印跡分析用LDL、ox-LDL刺激后HepG2細胞HSP70表達量是否改變?！　⊙芯繎肧SH和cDNA芯片分離到52條家兔肝臟高

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