SDF-1對神經干細胞在大鼠脊髓損傷恢復中作用的影響.pdf

1、背景和目的：
　　基質細胞衍生因子-1(stromalcell-derived factor1，SDF-1)屬CXC趨化因子亞家族，最初從骨髓基質細胞中克隆發(fā)現，是一類對某些細胞具有趨化作用的分泌型多肽。SDF-1在體內通過與趨化因子受體結合參與調節(jié)體內多種生理或病理過程，特別是與中樞神經損傷后的炎癥反應、各種內源性干細胞向病灶部位的募集及局部新生血管的形成有密切關系。本研究主要通過體內外實驗來觀察SDF-1是否影響神經干細胞的遷

2、移，進而影響脊髓損傷后大鼠下肢功能恢復。
　　資料與方法：
　　1.神經干細胞的提取、培養(yǎng)、鑒定及細胞熒光標記:通過解剖新生SD(Sprague-Dawley)大鼠獲得大腦組織，利用無血清神經干細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)，獲取神經干細胞，并觀察其增殖分化，然后應用免疫熒光法鑒定神經球表面巢蛋白和Westernblot鑒定CXCR4蛋白的表達，使用CM-Dil對神經干細胞細胞進行標記。
　　2.實驗分組:體外Transwell遷移實

3、驗中，根據不同濃度的培養(yǎng)條件將實驗分為4組:①對照組（下室不加SDF-1，神經干細胞不經AMD3100孵育）;②AMD3100組（下室不加SDF-1，神經干細胞經AMD3100孵育）;③SDF-1+AMD3100組（下室加SDF-1，神經干細胞經AMD3100孵育）;④SDF-1組（下室加SDF-1，神經干細胞不經AMD3100孵育）。體內實驗中將72只成年雌性SD大鼠按隨機數字表法分為4組:①空白對照組（不移植神經干細胞）;②神經干細

4、胞移植組;③神經干細胞聯(lián)合SDF-1移植組;④AMD3100孵育神經干細胞移植組。
　　3.大鼠脊髓損傷模型的制作、細胞移植及標本制作:應用自制改良Allen's打擊器制備大鼠脊髓損傷模型，在造模成功7天時通過尾靜脈進行神經干細胞移植。在大鼠損傷后的1、7、14、21、28天，分別對各組脊髓損傷大鼠進行BBB(Basso-Beattie-Bresnahan)后肢功能評定，隨后處死大鼠，取出脊髓標本進行冰凍切片，觀察脊髓局部熒光及病

5、理HE染色結果。
　　4.統(tǒng)計學方法:統(tǒng)計數據用均數±標準差（(x)±S）表示，統(tǒng)計分析采用SPSS17.0統(tǒng)計專業(yè)軟件包進行處理，采用單因素方差分析(analysis of variance ，ANOVA)進行多組之間定量資料比較，各組間的兩兩比較使用S-N-K(Student-Newman-Keulstest，S-N-K)檢驗，P＜0.05時認為結果具有統(tǒng)計學差異。
　　結果：
　　1.從新生SD大鼠腦組織中經分離

6、、培養(yǎng)得到的神經干細胞能形成神經球，細胞免疫熒光鑒定細胞巢蛋白表達陽性，且SDF-1相應受體CXCR4在神經干細胞表面表達陽性。
　　2.在體外Transwell遷移實驗中，隨著SDF-1濃度梯度增加(50～200ng/ml)，下室神經干細胞遷移數目不斷增加，說明遷移細胞數量和SDF-1濃度呈正相關，與對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而在200ng/ml與250ng/ml時，兩組遷移量差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）

7、;CXCR4的阻斷劑AMD3100能明顯抑制SDF-1趨化遷移效果，與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　3.在大鼠體內實驗中，單獨神經干細胞移植組和神經干細胞與SDF-1聯(lián)合移植組大鼠脊髓損傷區(qū)均能見到熒光標記細胞聚集，HE染色結果未見明顯空洞形成，且脊髓損傷大鼠BBB評分明顯提高，在細胞移植后的7、14、21天與其他兩組相比BBB評分差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且聯(lián)合治療組評分優(yōu)于單獨神經干細胞治療組，差

8、異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;AMD3100孵育神經干細胞移植組，脊髓損傷大鼠功能未見明顯改善，與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　結論：
　　1.從新生大鼠腦組織提取神經干細胞過程簡單，技術便于掌握;細胞培養(yǎng)所需時間短，可保證短間內得到足量細胞，為后續(xù)實驗開展奠定了基礎。
　　2.神經干細胞表面能表達SDF-1趨化因子受體CXCR4。
　　3.SDF-1對神經干細胞的趨化遷移效應具有明顯的濃度