跑臺運動對腦缺血大鼠空間記憶、Ku蛋白與細胞周期蛋白的影響.pdf

1、目的：探討跑臺運動對大鼠高血脂腦缺血再灌注后海馬區(qū)Ku蛋白和細胞周期蛋白的作用。
　　方法：本實驗將SPF級雄性高血脂誘導的Wistar大鼠120只隨機分為：對照組（n=40），模型組（n=40）、實驗組（n=40）。高血脂模型采用高血脂飼料喂養(yǎng)6周形成高血脂大鼠后。實驗組于建模前15天開始進行跑臺運動20m/min，30min/day，應用四血管阻斷法（Pulsinelli4VO法）制備全腦缺血模型，分別于缺血15min再灌注后

2、3h、6h、24h和48h四個時間點處死大鼠，缺血再灌注后24h和48h大鼠在處死前采用水迷宮檢測各組大鼠視空間記憶。各時間點的標本采用蘇木素-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）觀察各組大鼠腦組織神經元細胞形態(tài)的變化情況；采用免疫組織化學染色和免疫印跡蛋白（western-blotting）方法檢測各組大鼠腦組織中Ku70、Ku80、CycinA和CyclinE蛋白的表達情況。應用SPSS17.0統(tǒng)

3、計分析軟件對所得實驗數(shù)據進行重復設計的單因素方差分析，以P<0.05，表示差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結果：1水迷宮檢測結果：與對照組比較，模型組大鼠在各時間點（24h、48h）的潛伏期時間顯著延長，穿臺次數(shù)顯著減少，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與模型組比較，實驗組大鼠在各時間點（24h、48h）的潛伏期時間顯著縮短而穿臺次數(shù)顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。2形態(tài)觀察結果（HE染色）對照組大鼠海馬區(qū)神經元細胞排列整

4、齊，胞漿淡染；模型組與對照組比較3h結構形態(tài)即出現(xiàn)形態(tài)改變，表現(xiàn)為細胞失去正常結構，部分細胞形態(tài)異常，6h海馬區(qū)可見較多腫脹的神經元，間質水腫，結構疏松，神經元和膠質細胞出現(xiàn)核固縮、深染，也有部分神經元胞核完全消失，形成空泡狀結構；24h腦組織神經細胞破壞，可見較多變性壞死的神經細胞，神經細胞呈空泡狀或海綿狀，神經元細胞出現(xiàn)核固縮、碎裂和核仁消失現(xiàn)象，間質水腫明顯；48h可見壞死神經細胞，腦組織結構破壞，結構疏松，核膜碎裂、核仁消失，各

5、時間點中以48h損傷最嚴重；實驗組大鼠海馬區(qū)神經元損傷較模型組明顯減輕，可見壞死的神經元減少，間質水腫較輕，核固縮和空泡較少。3 Ku70免疫組化和Western blot分析結果：免疫組化結果：Ku70免疫組化染色呈棕黃色，定位于細胞胞漿中，主要表達在神經元細胞。與對照組比較，模型組大鼠在各時間點（3h、6h、24h、48h）Ku70蛋白的表達增加，且24h達高峰，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與模型組比較，實驗組大鼠在各時間點（

6、3h、6h、24h、48h）Ku70蛋白的表達明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；Western blot分析結果：與對照組比較，模型組大鼠在各時間點（3h、6h、24h、48h） Ku70蛋白的表達增加，且24h達高峰，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與模型組比較，實驗組大鼠在各時間點（3h、6h、24h、48h）Ku70蛋白的表達明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。4 Ku80免疫組化和Western blot分析

7、結果：免疫組化結果：Ku80免疫組化染色呈棕黃色，定位于細胞胞核中，主要表達在海馬區(qū)神經細胞。與對照組比較，模型組大鼠在各時間點（3h、6h、24h、48h）Ku80蛋白的表達明顯增加，且6h達高峰，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與模型組比較，實驗組大鼠在各時間點（3h、6h、24h、48h）Ku80蛋白的表達明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；Western blot分析結果：與對照組比較，模型組大鼠在各時間點（3h、6h

8、、24h、48h）Ku80蛋白的表達明顯增加，且6h達高峰，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與模型組比較，實驗組大鼠在各時間點（3h、6h、24h、48h）Ku80蛋白的表達明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。5 CyclinA免疫組化和Western blot分析結果：免疫組化結果：CyclinA免疫組化染色呈棕黃色，定位于細胞胞核中，主要表達在海馬區(qū)神經細胞。與對照組比較，模型組大鼠在各時間點（3h、6h、24h、48h）

9、CyclinA蛋白的表達量逐漸增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與模型組比較，實驗組大鼠在各時間點（3h、6h、24h、48h） CyclinA蛋白的表達明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；Western blot分析結果：與對照組比較，模型組大鼠在各時間點（3h、6h、24h、48h）CyclinA蛋白的表達量逐漸增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與模型組比較，實驗組大鼠在各時間點（3h、6h、24h、48h）Cy

10、clinA蛋白的表達明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。6 CyclinE免疫組化和Western blot分析結果：免疫組化結果：CyclinE免疫組化染色呈棕黃色，定位于細胞胞核中，主要表達在海馬區(qū)神經細胞。與對照組比較，模型組大鼠在各時間點（3h、6h、24h、48h）CyclinE蛋白的表達逐漸降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與模型組比較，實驗組大鼠在各時間點（3h、6h、24h、48h） CyclinE蛋白的表

11、達明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；Western blot分析結果：與對照組比較，模型組大鼠在各時間點（3h、6h、24h、48h）CyclinE蛋白的表達降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與模型組比較，實驗組大鼠在各時間點（3h、6h、24h、48h）CyclinE蛋白的表達明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結論：1跑臺運動可改善全腦缺血再灌注大鼠空間記憶功能。2跑臺運動可增加Ku蛋白的表達，同