血管過氧化物酶1介導肺動脈高壓血管重構及機制研究.pdf

1、第一部分VPO1水平與肺動脈高壓的相關性
　　目的:
　　肺動脈高壓(pulmonaryarterialhypertension，PAH)是一類以肺動脈壓力升高為特征的臨床疾病，大量研究證實，氧化應激與PAH的發(fā)生發(fā)展密切相關。PAH發(fā)病時存在氧化和抗氧化系統(tǒng)調(diào)節(jié)紊亂，導致活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)增多和/或抗氧化能力降低，使得ROS通過多種途徑介導組織及細胞損傷。血管過氧化物酶(vascu

2、larperoxidase，VPO)是新發(fā)現(xiàn)的含血紅素的過氧化物酶家族成員，可催化H2O2（弱氧化劑）生成HOCl（強氧化劑）增強氧化應激效應，在血管組織中的表達以VPO1為主?；谘趸瘧ぴ赑AH發(fā)生發(fā)展過程中的重要作用及VPO1促氧化應激作用，本研究旨在整體水平初步探討VPO1與肺動脈高壓的相關性。
　　方法:
　　共納入59名PAH患者及43名健康體檢者，所有PAH患者均完善右心導管及其他相關檢查，采用WesternB

3、lot方法檢測血清中VPO1水平。比較兩組之間血清VPO1水平變化。
　　結果:
　　PAH患者血清VPO1濃度為127.46±7.47ng/ml，顯著高于健康對照組(89.94±7.91ng/μl，p＜0.01)，總?cè)巳褐醒錠PO1的濃度分布范圍為12.75～397.74ng/μl。
　　結論:
　　血清VPO1水平與肺動脈高壓發(fā)生發(fā)展可能相關。
　　第二部分VPO1介導氧化應激誘導肺動脈平滑肌細胞增殖

4、
　　目的:
　　肺動脈平滑肌細胞增殖導致的肺血管重構是PAH發(fā)生發(fā)展的重要機制之一。研究表明氧化應激與肺動脈平滑肌細胞增殖密切相關?；赩PO1可以通過催化H2O2生成HOCl并增強氧化應激效應的能力，本研究擬在原代肺動脈平滑肌細胞結合工具藥和基因沉默技術，通過檢測細胞增殖指標、VPO1表達、H2O2及HOCl水平，確證VPO1介導氧化應激促肺動脈血管平滑肌細胞增殖作用及其機制。
　　方法:
　　提取原代大鼠肺

5、動脈平滑肌細胞，予以低氧處理(3％O2，5％CO2，92％N，37℃，24h);以BrdU參入法檢測肺動脈平滑肌細胞的增殖指標;以WesternBlot法檢測細胞中VPO1、id1等蛋白的表達;以Real-timePCR法檢測細胞中VPO1、id1等mRNA含量;以ELISA法檢測細胞培養(yǎng)液中H2O2的含量;利用Nox特異性抑制劑DPI、H2O2特異性水解酶(catalase)及VPO1抑制劑ABAH等工具藥初步確定Nox/H2O2/H

6、OCl/id1信號途徑，在此基礎上，以siRNA沉默肺動脈平滑肌細胞中VPO1表達，觀察其對低氧所致細胞增殖的影響。
　　結果:
　　(1)低氧處理(3％O2)能顯著誘導肺動脈平滑肌細胞增殖;預先予以DPI、Catalase、ABAH能抑制低氧處理的誘導增殖效應。
　　(2)低氧處理(3％O2)能顯著誘導肺動脈平滑肌細胞VPO1、id1蛋白及mRNA水平，能顯著提高細胞培養(yǎng)液中H2O2及細胞中HOCl水平。預先予以DP

7、I、Catalase、ABAH能削弱低氧處理后細胞VPO1、id1蛋白及mRNA、細胞培養(yǎng)液中H2O2及HOCl水平的改變。
　　(3)利用siRNA技術能成功抑制原代肺動脈平滑肌細胞中VPO1表達水平;沉默原代肺動脈平滑肌細胞中VPO1能顯著抑制低氧處理(3％O2)誘導的細胞增殖效應及降低細胞中id1蛋白及mRNA、細胞培養(yǎng)液中HOCl水平。
　　結論:
　　低氧處理可上調(diào)VPO1表達水平，VPO1可通過介導Nox/