兔脂肪干細胞與PLA-PEG共聚物生物相容性研究.pdf

1、目的：建立兔脂肪干細胞（rabbit adipose-derived stem cells，rADSCs）的分離培養(yǎng)方法，探討rADSCs的生物學特性，及其體外復合聚乳酸-聚乙二醇共聚物（polylactide-polyethylene glycol copolymers，PLA-PEG）的生物相容性，為進一步構(gòu)建脂肪干細胞組織工程化角膜組織提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法：（1）采用膠原酶消化法及貼壁篩選法分離純化rADSCs，采用體外

2、誘導成骨、成脂實驗對rADSCs的多向分化潛能進行驗證。（2）采用不同復感染指數(shù)（Multiplicities of infection，MOI）值的慢病毒載體轉(zhuǎn)染rADSCs，熒光倒置顯微鏡下觀察綠色熒光（green fluorescence protein，GFP）表達的情況并統(tǒng)計其相應(yīng)的轉(zhuǎn)染效率，MTT法檢測負載GFP的慢病毒轉(zhuǎn)染對細胞生長狀態(tài)的影響情況，進一步評價GFP負載慢病毒對細胞的毒性情況。（3）將轉(zhuǎn)染的rADSCs接種于

3、PLA-PEG支架上，通過Hoechst DNA定量法觀察第1天至第8天材料上細胞的增殖情況；LDH細胞毒性檢測評估PLA-PEG材料對rADSCs的細胞毒性；激光共聚焦顯微鏡、掃描電子顯微鏡觀察接種后1,3,5和7天細胞在支架上的生長、粘附等情況。
　　結(jié)果：（1）原代rADSCs多呈短棒狀、聚集生長傾向。傳代后細胞均勻、呈成纖維細胞樣生長。體外成脂分化誘導2周，油紅O染色胞質(zhì)可見紅色脂滴；成骨分化誘導2周茜素紅染色可見礦化結(jié)節(jié)

4、。（2）當復感染指數(shù)MOI為50、100、500時慢病毒介導GFP均可成功轉(zhuǎn)染rADSCs，MOI為100時，細胞轉(zhuǎn)染效率可達50％以上且對細胞的正常生長沒有顯著影響。（3）MTT法顯示細胞接種于PLA-PEG材料后隨時間延長細胞數(shù)量增加，第7天細胞生長達到高峰。激光共聚焦顯微鏡顯示，細胞在PLA-PEG材料上生長良好且隨培養(yǎng)時間延長細胞數(shù)量增加。掃描電子顯微鏡顯示，細胞在材料表面緊密貼附并分泌細胞外基質(zhì)使細胞緊密生長。
　　結(jié)論