轉(zhuǎn)錄因子E2F1在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)和作用.pdf

1、目的:細(xì)胞周期轉(zhuǎn)錄因子E2F1是E2F家族最早被克隆的一員,調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、凋亡、死亡等。近年來研究發(fā)現(xiàn)E2F1表達(dá)水平及其活性變化與腫瘤的發(fā)生和惡性進(jìn)展密切相關(guān)。有學(xué)者研究表明E2F1在乳腺癌,結(jié)腸癌,黑色素瘤等不同類型腫瘤中的表達(dá)異常,但關(guān)于E2F1在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá),目前尚無報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)主要研究E2F1在腎透明細(xì)胞癌組織和對應(yīng)瘤旁組織中的表達(dá)情況,對E2F1的mRNA相對表達(dá)量和臨床病理資料進(jìn)行相關(guān)性分析,并在腎透明細(xì)胞

2、癌細(xì)胞株中進(jìn)行E2F1基因的過表達(dá),研究對腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲能力的影響,了解E2F1在腎透明細(xì)胞癌發(fā)生和惡性進(jìn)展中的作用。為臨床治療腎透明細(xì)胞癌尋找新的靶點(diǎn)和途徑。
　　方法:①通過實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-timePCR)及蛋白免疫印跡(western-blot)方法檢測52例腎透明細(xì)胞癌及其相對應(yīng)的癌旁組織中E2F1的mRNA及蛋白表達(dá)水平,并采用相關(guān)性分析分別檢驗(yàn)?zāi)[瘤組織E2F1基因的mRNA表達(dá)水平相關(guān)性;②通過w

3、estern-blot方法檢測人正常腎小管上皮細(xì)胞株HKC,腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株786-O,A498,Caki-1和Caki-2細(xì)胞株中E2F1的表達(dá),使用pcDNA-3.1-空質(zhì)粒和pcDNA-3.1-HA-E2F1分別轉(zhuǎn)染腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株786-O和A498,然后通過流式細(xì)胞儀及MTS法分別檢測兩組的細(xì)胞周期及細(xì)胞增殖能力的變化;③使用pcDNA-3.1-空質(zhì)粒和pcDNA-3.1-HA-E2F1分別轉(zhuǎn)染腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株786-O

4、和A498,通過劃痕實(shí)驗(yàn)及transwell方法檢測786-O和A498細(xì)胞株的遷移和侵襲能力的變化。結(jié)果:①E2F1的mRNA水平在腎透明細(xì)胞癌手術(shù)標(biāo)本中表達(dá)明顯升高(p=0.0002),相應(yīng)的蛋白水平對比與mRNA變化一致,E2F1的mRNA水平在不同年齡、性別組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05),而在組織學(xué)分級、T分期、臨床分期和大血管浸潤(腎靜脈和下腔靜脈)與否組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。相關(guān)性分析顯示在腎透明細(xì)胞癌組織中E2

5、F1的mRNA水平(△CT值)與病理組織學(xué)分級(相關(guān)系數(shù)r=-0.470,p<0.001)、T分期(相關(guān)系數(shù)r=-0.455,p=0.001)、臨床分期(相關(guān)系數(shù)r=-0.467,p<0.001)、大血管浸潤呈負(fù)相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=-0.475,p<0.001);②在兩株腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系786-O和A498中轉(zhuǎn)染pcDNA-3.1-HA-E2F1后,腫瘤增殖能力上升(p<0.05),786-O細(xì)胞株中,pcDNA-3.1-HA-E2F1

6、實(shí)驗(yàn)組的G1期細(xì)胞比例是51.97±1.66％,而對照組中的G1期細(xì)胞比例是65.47±1.11%和64.20±0.71%(p<0.001),在A498細(xì)胞株中,pcDNA-3.1-HA-E2F1實(shí)驗(yàn)組的G1期細(xì)胞比例是53.22±0.58%,而對照組中的G1期細(xì)胞比例是62.65±0.79%和63.47±0.86%(p<0.001);③E2F1在腎透明細(xì)胞癌腫瘤細(xì)胞株786-O、A498、Caki-2、Caki-1的蛋白表達(dá)水平比HK

7、C細(xì)胞株高(p值均<0.05),在腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞系786-O和A498中轉(zhuǎn)染pcDNA-3.1-HA-E2F1后,腫瘤遷移和侵襲能力增強(qiáng)(p值均<0.05)。E2F1下游的靶基因金屬蛋白酶MMP2和MMP9的mRNA表達(dá)水平顯著上升。結(jié)論:①轉(zhuǎn)錄因子E2F1異常高表達(dá)可能與腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生和惡性進(jìn)展有關(guān);②E2F1通過促使細(xì)胞周期G1向S期進(jìn)展影響腫瘤細(xì)胞的增殖;③E2F1過表達(dá)促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株遷移和侵襲能力。金屬蛋白酶MMP