臨床分離一株放線菌樣菌種的生物學(xué)與基因鑒定.pdf

1、目的：對(duì)臨床分離的一株放線菌樣菌種進(jìn)行生物學(xué)特性及相關(guān)的基因鑒定，探討其分類學(xué)地位。
　　方法：將分純的放線菌樣菌株IFM10348以分區(qū)劃線法接種于腦心浸液瓊脂平板上，置于37℃溫箱中需氧培養(yǎng)2-4d，觀察IFM10348菌落的形成及特征。取培養(yǎng)物分別進(jìn)行革蘭染色和抗酸染色。通過(guò)掃描電鏡對(duì)IFM10348進(jìn)行觀察、拍照。將IFM10348接種于腦心浸液瓊脂平板上，分別置于5℃、15℃、20℃、25℃、40℃、45℃需氧培養(yǎng)，觀察

2、生長(zhǎng)現(xiàn)象。通過(guò)碳源利用試驗(yàn)及 API細(xì)菌數(shù)值鑒定對(duì)IFM10348進(jìn)行生化反應(yīng)鑒定。采用氣相色譜分析法對(duì)IFM10348進(jìn)行脂肪酸分析，以了解其脂肪酸組成及含量。通過(guò)藥物敏感性試驗(yàn)，觀察IFM10348對(duì)不同藥物的敏感性。通過(guò)研究IFM10348的形態(tài)、染色、培養(yǎng)特性、生化反應(yīng)、脂肪酸組成、藥物敏感性，對(duì)IFM10348進(jìn)行生物學(xué)特性的鑒定。通過(guò)對(duì)IFM10348的16S rRNA、gyrB和secA1基因序列進(jìn)行測(cè)定及分析，對(duì)其進(jìn)行基

3、因鑒定。將IFM10348的生化反應(yīng)及脂肪酸分析結(jié)果與其親緣關(guān)系最近菌種的模式菌株的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，進(jìn)一步探討IFM10348的分類學(xué)地位。
　　結(jié)果：菌株IFM10348在腦心浸液瓊脂平板上經(jīng)37℃需氧培養(yǎng)2d后，肉眼可見(jiàn)形成直徑1.5-3mm的淡黃色、邊緣不整齊的粗糙菌落。革蘭染色陽(yáng)性，抗酸染色陰性。掃描電鏡觀察到菌體為桿狀或短棒狀，未發(fā)現(xiàn)鞭毛。IFM10348在腦心浸液瓊脂平板上經(jīng)5℃、45℃需氧培養(yǎng)8d均未見(jiàn)生長(zhǎng)。經(jīng)15

4、℃、20℃需氧培養(yǎng)5-7d，25、40℃需氧培養(yǎng)2-3d，形成同37℃培養(yǎng)的菌落特征。IFM10348可利用L-亮氨酸、L-苯丙氨酸、L-丙氨酸、蛋氨酸、3-甲基戊二酸、D-葡糖酸、α-酮戊二酸、3-甲基-己二酸、亞氨基二乙酸、4甲基傘形酮基-磷酸鹽、對(duì)硝基苯基-αD-葡糖苷、對(duì)硝基苯基-磷酸鹽、胸腺嘧啶脫氧核苷、粘菌素、D-果糖作為碳源。可還原硝酸鹽、發(fā)酵葡萄糖，可與吡嗪酰胺、焦谷氨酸-β-萘胺、2-萘基-磷酸鹽、2-萘基-αD-吡喃

5、型葡萄糖苷發(fā)生反應(yīng)，觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性。IFM10348主要含C16:0和C18:1兩種脂肪酸，此外還有 C16:1、C18:0、C18:2、C18:3脂肪酸。藥物敏感性試驗(yàn)顯示IFM10348對(duì)妥布霉素、卡那霉素、復(fù)方新諾明敏感，對(duì)左氧氟沙星、環(huán)丙沙星耐藥。16S rRNA基因序列測(cè)定結(jié)果在Genebank上比對(duì)發(fā)現(xiàn)，分離菌株IFM10348屬于放線菌戈登氏菌屬。在系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)上可見(jiàn)分離菌IFM10348與該菌屬的模式菌株G. hirsuta

6、 DSM44140T和G. malaquae IMMIB WWCC-22T親緣關(guān)系最近。經(jīng)Genetyx軟件分析，分離菌IFM10348與G. hirsuta DSM44140T和G. malaquae IMMIB WWCC-22T的16S rRNA基因序列相似度最高，分別為96.982％和97.402%。IFM10348的生化反應(yīng)及脂肪酸分析結(jié)果與G.hirsutaDSM44140T和G.malaquae IMMIB WWCC-22T

7、均有明顯差別。
　　結(jié)論：根據(jù)本文研究結(jié)果,我們認(rèn)為：
　　1.通過(guò)生物學(xué)特性及16S rRNA基因鑒定，臨床分離的放線菌樣菌株IFM10348屬于戈登氏菌屬的放線菌。
　　2.通過(guò)對(duì)分離菌株 IFM10348的基因鑒定發(fā)現(xiàn)，IFM10348與戈登氏菌屬各有效發(fā)表種的16S rRNA、gyrB和secA1基因序列有一定的差異。其生物學(xué)特性與其親緣關(guān)系最近菌種的模式菌株也不完全相同，對(duì)于菌種的最終界定還需通過(guò)論文發(fā)表及國(guó)