塞來昔布抑制人肝癌、胃癌細胞株增殖及誘導凋亡的研究.pdf

1、目的：研究特異性環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑塞來昔布對人肝癌細胞株SMMC-7721和人胃癌細胞株MKN-45是否有抑制增殖、誘導凋亡作用并初步探討其作用機制。 方法： 1、體外培養(yǎng)人肝癌細胞株SMMC-7721和人胃癌細胞株MKN-45，每種細胞分七組，分別予0、5、10、25、50、75、100μmol/L濃度的塞來昔布干預后，倒置相差顯微鏡觀察各組細胞形態(tài)的變化； 2、采用四氮唑鹽比色法(MTT法)觀察

2、不同濃度的塞來昔布作用后，細胞增殖活力的改變； 3、流式細胞儀檢測細胞凋亡率及細胞周期變化； 4、免疫細胞化學法觀察Bcl-2蛋白和Bax蛋白表達變化情況： 5、透射電鏡觀察細胞超微結構的改變； 6、：DNA凝膠電泳技術觀察凋亡細胞變化。 結果： 1、倒置相差顯微鏡顯示隨著塞來昔布濃度增加和時間延長，細胞增殖變慢，體積變小，變圓、漂浮的比例明顯增大； 2、MTT法顯示隨著塞來昔布濃

3、度和作用時間增加，細胞抑制率上升。人肝癌細胞株SMMC-7721在25、50、75、100μmol/L塞來昔布濃度下，24小時細胞抑制率分別為15.41±3.11％、34.56±2.41％、56.80±1.01％、86.15±0.43％，48小時抑制率分別為33。45±0.66％、66.72±1.77％、76。14±2.43％、97.27±0.80％。人胃癌細胞株MKN.45在25、50、75、100μmol/L塞來昔布濃度下，24小時

4、細胞抑制率分別為16.39±1.43％、23.55±0.11％、62.78±1.42％、87.53±0.27％，48小時細胞抑制率分別為30.40±0.68％、46.18±1.80％、89.77±0.21％、97.94±0.18％，(P<0.05)； 3、流式細胞儀測定塞來昔布組出現(xiàn)凋亡峰，50、100μmol/ml濃度的塞來昔布干預24小時后，人肝癌細胞株SMMC-7721凋亡率分別為14。567±1.06％、40.467±2

5、.0％，人胃癌細胞株MKN-45凋亡率分別為25.5±2.66％、57.23±2.19％； 4、免疫細胞化學法顯示經塞來昔布干預后，凋亡蛋白Bax表達增加，而Bcl-2表達減少，并隨時間和藥物濃度變化而明顯： 5、透射電鏡觀察顯示塞來昔布組細胞呈凋亡表現(xiàn)，核固縮、碎裂，染色質濃縮，邊集，有凋亡小體形成；6、塞來昔布(50μmol/L、100μmol/L)組培養(yǎng)48小時后DNA瓊脂糖凝膠電泳可見典型的梯狀條帶，而對照組細胞