Toll樣受體4介導乳腺癌侵襲能力增強的實驗研究.pdf

1、目的:Toll樣受體介導的細胞信號傳導在多種腫瘤細胞的侵襲、生存和轉(zhuǎn)移中的作用已經(jīng)被了解。本研究旨在研究Toll樣受體4(TLR4)在人類乳腺癌細胞中的表達及其在腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移中的生物學作用,探討其作為腫瘤治療靶點的潛在作用。
　　方法:本研究采用MCF-7和MDA-MB-231低轉(zhuǎn)移和高轉(zhuǎn)移能力的人類乳腺癌細胞株。體外實驗,LPS刺激兩株細胞后,分別采用RT-PCR、Real-time PCR、FCS和western blott

2、ing等方法檢測TLR4在基因和蛋白水平的表達。TLR4受LPS激活后,采用RT-PCR和 Real-time PCR檢測腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因MMP-2、MMP-9和 VEGF的表達;并采用ELISA檢測其對應(yīng)的培養(yǎng)上清中的蛋白表達水平。采用Western blot檢測TLR4信號傳導通路下游蛋白MyD88的表達。細胞培養(yǎng)上清中的炎性細胞因子采用CBA方法進行測定。體內(nèi)實驗,向雌性BALB/c裸鼠腋下皮下注射MCF-7和MDA-MB-231

3、細胞株構(gòu)建人類乳腺癌腫瘤轉(zhuǎn)移模型。觀測移植瘤生長體積及重量;采用免疫組化方法檢測移植瘤中TLR4表達情況;通過鏡下觀察分離肝和肺組織尋找轉(zhuǎn)移灶的方法對移植瘤遠處轉(zhuǎn)移情況進行評估。收集乳腺癌患者腫瘤組織及癌旁組織,采用RT-PCR、Real-time PCR和免疫組化方法檢測腫瘤組織中的TLR4表達情況,分析TLR4表達與乳腺癌病情進展的關(guān)系。
　　結(jié)果:體外實驗結(jié)果表明,LPS刺激MCF-7和MDA-MB-231兩株細胞均能引起T

4、LR4基因和蛋白水平表達的上調(diào)。MTT檢測結(jié)果顯示,LPS對兩株細胞的增殖沒有影響。LPS激活TLR4后,腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因MMP-2、MMP-9和VEGF在基因和蛋白水平的表達均明顯上調(diào)。Transwell侵襲實驗表明,LPS能明顯增強MDA-MB-231細胞株的侵襲能力;劃痕實驗表明,LPS能顯著增強MCF-7細胞株的侵襲能力。此外,LPS刺激能誘導TLR4信號通路下游MyD88蛋白表達的顯著上調(diào),促進IL-6和IL-10的分泌。體內(nèi)