IL-24對人卵巢癌SKOV3細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：觀察IL-24對卵巢癌SKOV3細(xì)胞凋亡的影響。 方法：將IL-24真核表達(dá)載體pcDNA3.1(一)-IL-24和空載體pcDNA3.1(一)分別用電轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞，經(jīng)G418篩選獲取IL-24的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染克隆，以野生型SKOV3細(xì)胞作為陰性對照，用RT-PCR檢測IL-24mRNA在三組細(xì)胞中的表達(dá)情況，hoechst33258熒光染色法觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞早期凋亡率。 結(jié)果：

2、1.3組SKOV3細(xì)胞在含G418 600 μ g/ml的完全性培養(yǎng)液培養(yǎng)一周后，顯微鏡下觀察陰性對照組細(xì)胞全部死亡，IL-24轉(zhuǎn)染組及空載體轉(zhuǎn)染組形成少量的SKOV3細(xì)胞克??；將G418濃度改為300 μ g/ml繼續(xù)培養(yǎng)兩周后，IL-24組及空載體組可見大量島狀的細(xì)胞團(tuán)塊生長，獲得大量的SKOV3細(xì)胞陽性克隆。 2.RT-PCR產(chǎn)物電泳顯示，IL-24轉(zhuǎn)染組可分別在600<'+>bp和500+bp處擴(kuò)增出IL-24mRNA和

3、GADPH特異性條帶；陰性對照組和空載體轉(zhuǎn)染組SKOV3細(xì)胞，未見IL-24mRNA的特異性條帶。 3.Hoechst33258染色顯示：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染IL-24的SKOV3細(xì)胞在熒光顯微鏡下可觀察到不同程度的凋亡細(xì)胞，表現(xiàn)為：細(xì)胞核固縮，呈致密強(qiáng)藍(lán)色熒光；DNA濃縮邊聚向核膜靠攏形成半月形；部分細(xì)胞核碎裂成塊狀形成凋亡小體。而陰性對照組和轉(zhuǎn)染空載體的SKOV3細(xì)胞染色后顯示細(xì)胞核形態(tài)規(guī)則，呈淡藍(lán)色熒光，極少見到凋亡小體和凋亡細(xì)胞。

4、 4.流式細(xì)胞儀檢測未轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)染空載體及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染IL-24后的各組SKOV3細(xì)胞早期平均凋亡率分別為3.33﹪，3.60﹪，14.51﹪。三組SKOV3細(xì)胞早期凋亡細(xì)胞率的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1205.073，P<0.05)，組間兩兩比較發(fā)現(xiàn)，陰性對照組、空載體轉(zhuǎn)染組與mda-7轉(zhuǎn)染組SKOV3細(xì)胞之間，早期凋亡細(xì)胞率有顯著性差異(p<0.05)；而陰性對照組與空載體轉(zhuǎn)染組之間，早期凋亡細(xì)胞率無顯著性差異(p=0.318)。