超聲微泡破裂法促進骨形成蛋白-2基因在小鼠骨骼肌表達的研究.pdf

1、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(Bone Morphogenetic Protein-2，BMP-2)作為一種強效誘骨因子，可誘導具有成骨分化潛能的間質細胞向成骨細胞分化，在牙周組織再生和修復中具有重要的作用。但將外源性生長因子直接植入缺損部位，其存在的時間及濃度是有限的，往往難以達到牙周組織完全再生的需要?；蛑委熂夹g引入牙周病治療的研究領域，為促進牙周組織的完全再生提供了新的方向。 將DNA導入宿主的方法和途徑是多種多樣的，其中裸質粒直

2、接注射法是公認的一種既簡便又有效的方法，并且安全性高，被認為是基因治療的發(fā)展方向。但是質粒的轉染效率較低，所以尋找提高質粒轉染效率的方法是目前基因治療研究的熱點之一。最近，國內外學者研究發(fā)現超聲微泡造影劑可作為一種新型的體內基因轉染載體，在一定條件的超聲照射下能促進目的基因安全而有效的定向轉移，增加外源性基因轉化率和表達水平，該方法有可能成為基因治療研究中新的突破點。 因此本實驗采用超聲微泡破裂法將含增強型綠色熒光蛋白的重組BM

3、P-2質粒plRES-rhBMP2-EGFP進行小鼠后肢骨骼肌體內轉染，研究微泡造影劑在超聲作用下能否促進BMP-2基因在小鼠體內表達，為其介導的BMP-2直接基因療法在牙周再生中應用的可行性提供初步實驗數據。 方法： 24只BALB/c小鼠隨機分為4組，每組6只，A組和B組選擇右側脛前肌為注射點，其中A組注射質粒，B組注射質粒與微泡造影劑的混合液后用超聲輻照，質粒注射量為3μg；C組和D組選擇右側股四頭肌為注射點，其中

4、C組注射質粒，D組注射質粒和微泡造影劑的混合物后用超聲輻照，質粒注射量為100μg。7天后處死A組和B組小鼠，取小鼠脛前肌在倒置熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白的表達情況，14天后處死C組和D組小鼠，取股四頭肌免疫組化檢測hBMP-2表達情況。 結果： 7天后B組綠色熒光陽性肌纖維百分率高于A組(P＜0.05)；14天后，C組和D組都可檢測到hBMP-2的表達，但D組hBMP-2表達量多于C組(P＜0.05)。 結論