低頻脈沖電磁場對CRP作用下骨髓來源內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖、凋亡及一氧化氮分泌功能變化的影響.pdf

1、研究背景與目的：
　　新生血管形成是慢性缺血的重要代償方式，心肌缺血可以刺激血管再生及側(cè)枝循環(huán)的建立，恢復(fù)心肌的血液灌注。已有研究表明，在成人新生血管形成過程中，骨髓來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞的動員和分化起著非常重要的作用。而EPC的數(shù)量及功能與冠狀動脈疾病的危險因素呈副相關(guān)。作為危險因素之一的CRP，在冠心病時其血清濃度明顯升高，實驗證明，EPC與一定濃度的CRP共同孵育，可使EPC數(shù)量呈劑量依賴性減少。CRP可抑制EPC的分泌功能，明顯

2、降低EPC內(nèi)皮一氧化氮合酶mRNA及表面標(biāo)志物的表達(dá)，減少NO的釋放，從而抑制EPC的數(shù)量和功能，損害EPC介導(dǎo)的血管形成。
　　隨著高新技術(shù)的不斷發(fā)展，人們越來越多的暴露在低頻電磁場中，其生物學(xué)效應(yīng)也越來越受到人們關(guān)注。大量的研究表明，低頻脈沖電磁場可促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞及牛主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，促進(jìn)血管新生；刺激內(nèi)皮細(xì)胞FGF、TGF-β等動脈形成主要促進(jìn)因子的分泌。
　　本實驗擬探討在體外培養(yǎng)的條件下，不同強(qiáng)度及作用時

3、間的低頻脈沖電磁場對與有效濃度的CRP共培養(yǎng)的EPC增殖、凋亡及NO分泌變化的影響，明確有效磁場強(qiáng)度，為缺血性心臟病的治療探索新途徑。
　　方法：
　　第一部分：
　　EPC的分離培養(yǎng)及表型鑒定：1、取大鼠股骨骨髓，以密度梯度離心法分離出單核細(xì)胞，在添加了VEGF和bFGF的M199培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并定期觀察；2、DiI-ac-LDL和FITC-UEA-I免疫熒光雙染，鑒定細(xì)胞表型；
　　第二部分：
　　CR

4、P對EPC的影響：1、取培養(yǎng)4天的細(xì)胞，給與不同濃度的CRP干預(yù)3天，棄干預(yù)因素后繼續(xù)培養(yǎng)4天；2、MTT檢測其增殖能力；3、硝酸還原酶法檢測細(xì)胞的NO分泌能力。
　　低頻脈沖電磁場對12μg/mlCRP作用下EPC的影響：1、取培養(yǎng)4天的細(xì)胞，給與CRP及不同強(qiáng)度的低頻脈沖電磁場干預(yù)3天，棄干預(yù)因素后繼續(xù)培養(yǎng)4天；2、MTT檢測其增殖能力；3、硝酸還原酶法檢測細(xì)胞的NO分泌能力；4、流式細(xì)胞儀檢測凋亡率。
　　統(tǒng)計學(xué)分析：

5、數(shù)值均以x±s表示。數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，所用統(tǒng)計方法為單因素方差分析，多重均數(shù)差異顯著性檢驗采用LSD-t檢驗。
　　結(jié)果：
　　1、細(xì)胞鑒定結(jié)果顯示DiI-ac-LDL和FITC-UEA-I雙染陽性，證實培養(yǎng)的細(xì)胞為內(nèi)皮祖細(xì)胞。
　　2、與對照組相比，低濃度（4，8μg/ml）CRP干預(yù)72h對EPC的增殖、NO分泌能力的影響不顯著（P>0.05）。濃度≥12μg/mlCRP干預(yù)72h可明顯抑制EP

6、C的增殖與NO分泌（P<0.05），且隨著濃度的增加，抑制作用亦明顯增強(qiáng)，存在濃度依賴性（P<0.05）。
　　3、與單純CRP組（12μg/ml）相比，0.6mT8h，1.0mT2h磁場強(qiáng)度明顯促進(jìn)與CRP共培養(yǎng)的EPC的增殖和NO分泌，抑制其凋亡率（P<0.05）；1.4mT8h磁場組與單純CRP組相比，抑制EPC的增殖，促進(jìn)其凋亡，差異有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05），對EPC的NO分泌能力沒有明顯的影響（P>0.05）。