黃芩、黃柏提取液與抗-MRSA IgY體外抑菌活性的比較研究.pdf

1、[目的]耐甲氧西林金黃色葡萄球菌是醫(yī)院感染的重要致病細(xì)菌之一；黃芩抗菌范圍廣，對(duì)金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、肺炎球菌等常見病菌均有抑菌作用，臨床上可用于治療濕溫、暑溫、胸悶、惡心嘔吐、瀉痢、黃疸、咳嗽、高熱煩渴、血熱吐衄、癰腫瘡毒、胎動(dòng)不安等??；黃柏對(duì)金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、甲型鏈球菌、乙型鏈球菌、變形桿菌均有明顯的抑菌作用，臨床主要應(yīng)用于濕熱瀉痢、熱淋盜汗、瘡瘍腫毒等；抗-MRSA IgY對(duì)MRSA有明顯抑制作

2、用，它將對(duì)MRSA感染的防治起到積極作用。本研究擬通過體外抗菌活性的觀察，初步探討黃芩、黃柏的提取物，以及這兩個(gè)中藥組成的不同配伍液對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的抑菌作用，同時(shí)也對(duì)抗-MRSA免疫球蛋白抗菌活性進(jìn)行觀察，與中藥進(jìn)行比較，為臨床防治耐甲氧西林金黃色葡萄球菌感染提供思路。
　　 [方法]黃芩原液的制備采用二次煮沸法，取黃芩加入蒸餾水浸泡20min，強(qiáng)火加熱煮沸，文火煎煮30min，攪拌，過濾；藥渣再加入蒸餾水按上法煎熬

3、、過濾；兩次藥液合并濃縮，調(diào)pH值至7.8～8.0，并置離心管中，以4000r/min離心10min；121℃高壓蒸汽滅菌20min后備用；黃柏原液同樣的方法制備；IgY的提取采用改良水稀釋法，打蛋收集蛋黃液，以6倍雙蒸水稀釋蛋黃液，調(diào)節(jié)pH值為5.5，置4℃冰箱放置過夜，10000轉(zhuǎn)/分離心20min，收集上清液，加入硫酸銨，使硫酸銨的飽和度達(dá)45％，置4℃冰箱靜置8 h，以10000轉(zhuǎn)/分離心20min，棄去上清液，沉淀物按每mL卵

4、黃液加5mL PBS緩沖液(0.01 mol/L，pH7.0)溶解，將溶解液裝入透析袋對(duì)蒸餾水透析除NH4+，最后1次改用對(duì)PBS緩沖液透析，透析液用G6漏斗除菌過濾，即得IgY提取液。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌體抑菌作用的檢測(cè)采用瓊脂稀釋法，用M-H瓊脂對(duì)中藥進(jìn)行定量抑菌實(shí)驗(yàn)，用倍比稀釋的藥液制成含藥平板，將耐甲氧西林金黃色葡萄球菌新鮮培養(yǎng)物制成菌液(濃度相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)媳葷峁?，接種于各含藥平板上，以不加藥液的瓊脂平板為對(duì)照，于35℃

5、培養(yǎng)18～24 h，觀察最低抑菌濃度(MIC)，并統(tǒng)計(jì)出抑制50％試驗(yàn)菌株的最低藥物濃度(MIC50)和抑制90％試驗(yàn)菌株的最低藥物濃度(MIC90)以及累計(jì)抑菌百分率。
　　 [結(jié)果]用二次煮沸法提取的黃芩、黃柏具有有效成分易于煎出，吸收快，奏效迅速，作用強(qiáng)特點(diǎn)，因其操作簡單，不需特殊儀器設(shè)備，因此具有易于推廣的優(yōu)點(diǎn)；用改良水稀釋法提取的卵黃中IgY具有特異性強(qiáng)，純度高，效價(jià)高，耐熱，耐酸的特點(diǎn)，具有易于規(guī)模提取的優(yōu)點(diǎn)。耐甲氧

6、西林金黃色葡萄球菌體抑菌作用：黃芩提取液的MIC50為0.75mg/ml，MIC90為6.20mg/ml；黃柏MIC501.35mg/ml，MIC90為10.60mg/ml；黃芩：黃柏(1:1)MIC50為0.18mg/ml，MIC90為1.40mg/ml；黃芩：黃柏(1:2)MIC50為0.34mg/ml，MIC90為2.74mg/ml；黃芩：黃柏(2:1)MIC50為0.09mg/ml，MIC90為0.74mg/ml；抗-MRSA