雙孔鉀通道TASK-1在急、慢性缺氧性人肺血管收縮反應中的作用及可能機制探討.pdf

1、目的：研究雙孔鉀通道TASK-1在急、慢性缺氧時人肺動脈平滑肌細胞中的表達變化，及酪氨酸激酶c-Src抑制劑等藥物干預后產生的影響，探討雙孔鉀通道TASK-1在急、慢性缺氧性人肺血管收縮反應中的作用，及酪氨酸激酶c-Src調節(jié)TASK-1介導缺氧性人肺血管收縮反應的分子機制。
　　方法：原代培養(yǎng)人肺動脈平滑肌細胞（human pulmonary artery smooth muscle cells，hPASMCs），肺動脈來源于既

2、往無肺血管疾病或低氧血癥病史的肺腫瘤患者切除的肺，相差顯微鏡下鑒定平滑肌細胞形態(tài)特征，采用抗平滑肌細胞抗體α-SMA免疫組織化學染色法鑒定細胞純度（陽性率95％以上）。當培養(yǎng)皿中細胞生長密度融合至70%-90%時予以傳代，第3至第6代用于分子生物學實驗。運用經典缺氧模型對hPASMCs進行缺氧培養(yǎng)，分為正常組（Con）、缺氧30min組（Hypoxia30’）、缺氧6h組（Hypoxia6h）和缺氧48h組（Hypoxia48h），此外

3、，缺氧48h組予以酪氨酸激酶c-Src抑制劑PP2、PP2類似物PP3和酪氨酸磷酯酶抑制劑bpV孵育，記為缺氧48h+PP2組（Hypoxia48h+PP2）、缺氧48h+PP3組（Hypoxia48h+PP3）和缺氧48h+bpV組（Hypoxia48h+bpV），應用流式細胞儀記錄不同組細胞的細胞周期， RT-PCR技術檢測不同組細胞TASK-1的基因表達，Western Blot方法測定不同組細胞TASK-1的蛋白表達。
　

4、　結果：⑴細胞增殖周期變化：與正常對照組比較，缺氧30min組、缺氧6h組和缺氧48h組，隨缺氧時間延長，hPASMCs的S期百分率增加（P<0.001）；而與缺氧48h組比較，缺氧48h+PP2組hPASMCs的S期百分率下降（P<0.001）。⑵急、慢性缺氧時人肺動脈平滑肌細胞TASK-1的mRNA及蛋白表達變化：mRNA水平，與正常對照組比較，缺氧30min組TASK-1mRNA表達無顯著性差異（P>0.05），缺氧6h組TASK

5、-1mRNA表達增加(P<0.05)，缺氧48h組TASK-1mRNA表達顯著減少(P<0.001)；蛋白水平，與正常對照組比較，缺氧30min組、缺氧6h組和缺氧48h組，隨著缺氧時間延長，TASK-1蛋白表達降低(P<0.001)。⑶慢性缺氧時藥物干預后人肺動脈平滑肌細胞TASK-1 mRNA及蛋白表達變化：與缺氧48h組比較，缺氧48h+PP2組TASK-1mRNA及蛋白表達增加(P<0.01)，缺氧48h+bpV組TASK-1蛋

6、白表達下降（P<0.01），而缺氧48h+PP3組TASK-1蛋白表達無顯著性差異（P>0.05）。
　　結論：①缺氧促進人肺動脈平滑肌細胞增殖，酪氨酸激酶c-Src調節(jié)缺氧后人肺動脈平滑肌細胞的增殖力變化。②在人肺血管平滑肌細胞膜上表達的雙孔鉀通道TASK-1，參與急、慢性缺氧性人肺血管收縮反應，慢性缺氧抑制雙孔鉀通道TASK-1的表達。③酪氨酸激酶c-Src調節(jié)雙孔鉀通道TASK-1的表達介導缺氧性人肺血管收縮反應。④雙孔鉀通