草分枝桿菌對哮喘小鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞和TLR4表達的影響.pdf

1、目的:通過測定哮喘小鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞／CD4+T細胞百分率及CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞上的TLR4表達的變化；觀察糖皮質(zhì)激素對哮喘小鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞及TLR4的影響；評估早期應(yīng)用草分枝桿菌干預(yù)對哮喘小鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞及TLR4的表達的影響,探討草分枝桿菌的免疫調(diào)節(jié)作用,為尋找新的途徑更好地預(yù)防和治療哮喘提供實驗依據(jù)。
　　 方法:將雌性BALB／c小鼠40只,采用隨機數(shù)字表法分

2、為四組:正常對照組(NS)、哮喘組(OVA)、哮喘地塞米松治療組(OVA／GC)和哮喘草分枝桿菌治療組(OVA／Utilin),,于實驗第0 d和第14d OVA組、OVA／GC組和OVA／Utilin組小鼠采用腹腔注射卵白蛋白(OVA)和氫氧化鋁(Al(OH)3)混合液致敏；從實驗第21d起開始,以2％OVA每天霧化30min,連續(xù)霧化5d激發(fā)制備哮喘模型,OVA／GC組于每次激發(fā)前30min腹腔注射地塞米松(1mg／Kg),OVA／

3、Uilin組于第一次致敏前2周腹腔注射草分枝桿菌F.U.36注射液(烏體林斯)0.57ug隔天一次共三次,NS組則給予生理鹽水腹腔注射和霧化做對照。所有小鼠于末次激發(fā)后24 h引頸處死。取小鼠左肺組織作病理切片,蘇木素-伊紅(HE)觀察炎癥改變；取小鼠脾臟于不銹鋼細胞篩上研磨、淋巴細胞分離液分離制備脾組織單個核細胞懸液,利用流式細胞檢測技術(shù)檢測各組CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞占CD4+T細胞的百分率及CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞上的

4、TLR4平均熒光強度。
　　 結(jié)果:1)小鼠哮喘模型建立成功模型組小鼠在霧化過程中出現(xiàn)了明顯的類似人類哮喘急性發(fā)作癥狀:呼吸加快加深、前肢縮抬、二便失禁等表現(xiàn)。病理表現(xiàn)為:NS組氣道上皮無增厚,氣道及血管周圍未見炎癥表現(xiàn)；OVA組氣道及血管周圍均可見明顯以嗜酸性粒細胞增多為主的炎性細胞浸潤,部分細支氣管上皮細胞脫落不完整；OVA／GC組和OVA／Ulin組炎癥改變明顯減輕。2)流式細胞儀檢測結(jié)果顯示:(1)CD4+T淋巴細胞亞群

5、中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞百分率OVA組顯著低于NS組,OVA／GC組和OVA／Utilin組較OVA組小鼠明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.01),而OVA／GC組和OVA／Utilin組CD4+T淋巴細胞亞群CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞百分率略高于NS組小鼠,OVA／Utilin組百分率接近OVA／GC組小鼠,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。(2)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞上表達的TLR4平均熒光強度值OVA組

6、較NS組降低,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；OVA／GC組和OVA／Utilin組較OVA組明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；OVA／GC組較OVA／Utilin組稍低,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。(3)各組小鼠脾單個核細胞CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞上表達的TLR4平均熒光強度值與CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞百分率無相關(guān)性。
　　 結(jié)論:1)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞參與了哮喘免疫平衡調(diào)節(jié),其數(shù)量

7、降低和功能障礙可導(dǎo)致和加重哮喘的癥狀。OVA不能改變TLR4的表達,CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞上的TLR4對OVA誘發(fā)的哮喘小鼠的發(fā)病沒有作用。2)糖皮質(zhì)激素可促進哮喘小鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞數(shù)量的增加及TLR4的表達,可能是其治療哮喘的免疫學(xué)機制之一。3)早期應(yīng)用草分枝桿菌干預(yù)性治療,可通過促進CD4+CD25+細胞上的TLR4的表達和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞數(shù)目的增加,糾正了機體的免疫紊亂而發(fā)揮其治療作用,有可能