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文檔簡介
1、本文主要從以下幾個部分展開論述:
第一部分 抑制PKM2的siRNA協(xié)同抑制CCND1的作用機制研究
目的:研究siM2PK-1分子對CCND1表達的抑制作用并探討其機制。方法:通過克隆形成實驗及流式細胞術(shù)檢測siM2PK-1分子對于肝癌細胞增殖與周期的影響,利用實時定量PCR和Western blot檢測siM2PK-1分子對于CCND1的表達的影響,過表達PKM2及利用其它針對PKM2的干涉實驗確定siM2PK-
2、1對于CCND1抑制作用的特異性,生物信息學(xué)分析及報告基因檢測初步探究了siM2PK-1抑制CCND1表達的機制。結(jié)果:克隆形成實驗發(fā)現(xiàn)siM2PK-1分子對于SK-Hep-1細胞具有抑制增殖的作用,流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)siM2PK-1可以引起細胞周期阻滯于G0-G1期,實時定量PCR和Western blot證實siM2PK-1分子對于CCND1的表達在mRNA水平和蛋白水平都有影響,過表達PKM2分子不能引起CCND1分子在mRNA和
3、蛋白水平的上調(diào)表達,而利用其他的針對PKM2分子的siRNA也不能使CCND1的表達下調(diào),進而得出siM2PK-1分子具有雙靶向作用,而進一步利用生物信息學(xué)分析結(jié)合報告基因確定siM2PK-1可能通過不完全互補的模式與CCND1分子啟動子區(qū)的序列結(jié)合進而引起其啟動子區(qū)的CpG島的甲基化。結(jié)論:抑制PKM2的siM2PK-1分子具有協(xié)同抑制CCND1分子表達的作用。
第二部分 缺氧與miRNA表達關(guān)系的研究
目的:探討
4、不同缺氧條件對HepG2細胞中miR-210表達水平的影響。方法:采用CoCl2、物理缺氧以及Na2SO3三種不同的缺氧條件誘導(dǎo)HepG2細胞,利用實時定量 PCR技術(shù)檢測不同缺氧模式誘導(dǎo)前后HepG2細胞miR-210等表達變化。
結(jié)果:三種缺氧模式均可以誘導(dǎo)HepG2細胞miR-210表達上調(diào),其表達與CoCl2及Na2SO3的濃度有劑量依賴關(guān)系。結(jié)論:CoCl2、物理缺氧以及Na2SO3三種不同的缺氧條件均可以有效誘導(dǎo)H
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