白三烯受體拮抗劑和細胞周期蛋白D1對氣道重塑影響的試驗性研究.pdf

1、目的：使用哮喘大鼠模型，研究白三烯受體拮抗劑和細胞周期蛋白D1對哮喘大鼠氣道結(jié)構(gòu)的影響，探討白三烯受體拮抗劑和細胞周期蛋白D1對哮喘氣道重塑的干預(yù)作用及可能的機制。 方法：本實驗分兩部分組成，第一部分：將24只SD大鼠隨機分成4組：A (正常對照組)、B (哮喘模型組)、C(地塞米松組) 和 D (孟魯斯特組)。采用腹膜腔注射卵清蛋白、卡介苗和氫氧化鋁混懸液致敏和重復(fù)霧化吸入卵清白蛋白法復(fù)制哮喘大鼠模型。最后一次激發(fā)24小時后各

2、組大鼠行動物肺功能檢查(檢測氣道基本阻力和靜脈注射乙酰膽堿后氣道阻力變化)；肺組織HE染色、并經(jīng)光學(xué)顯微鏡和圖像分析系統(tǒng)分析支氣管管壁周長、氣道面積、氣道平滑肌面積等病理改變；經(jīng)Manssion染色觀察膠原的表達變化；ELISA法檢測各組大鼠血清中LTD4含量的變化；免疫組織化學(xué)法檢測氣道平滑肌肌動蛋白-α的表達。第二部分：將16只SD大鼠隨機分成2組：A (正常對照組)、B (哮喘模型組)，采用上述方法制作大鼠哮喘模型。對各組大鼠分別

3、行肺組織病理、Manssion染色、細胞周期蛋白D1 (免疫組織化學(xué)法和蛋白免疫印跡法)和氣道平滑肌肌動蛋白-α(免疫組織化學(xué)法) 檢測。分析細胞周期蛋白 D1 和膠原、肌動蛋白-α的相關(guān)性。 第一部分結(jié)果： (1) 白三烯受體拮抗劑對哮喘大鼠病理的影響：光鏡下可見哮喘模型組和治療組大鼠氣道粘膜破壞，杯狀細胞表達增加，粘膜下大量炎癥細胞浸潤，基地膜增厚，平滑肌增殖，治療組炎癥輕于模型組。分析比較各組大鼠氣道管壁面積、平滑

4、肌面積結(jié)果顯示：哮喘模型組大鼠氣道管壁面積、平滑肌層面積均顯著大于正常對照組；地塞米松組和孟魯斯特組氣道管壁面積、平滑肌厚度明顯的少于哮喘組，但多于正常對照組；孟魯斯特組表達略多于地塞米松組。 (2) 白三烯受體拮抗劑對哮喘大鼠肺功能的影響：哮喘組和治療組大鼠氣道基本阻力高于正常對照組(P<0.01)，孟魯斯特組和地塞米松組低于哮喘模型組(P<0.05)；地塞米松組略低于孟魯斯特組但沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。經(jīng)靜脈注射乙酰

5、膽堿后哮喘組和治療組大鼠氣道氣道阻力變化幅度高于正常對照組(P<0.01)；哮喘組高于孟魯斯特組和地塞米松組(P<0.01)。最后一次激發(fā)時地塞米松組低于孟魯斯特組(P<0.05)。 (3) 白三烯受體拮抗劑對哮喘大鼠膠原沉積的影響(Manssion染色)：與正常組比較，哮喘組、地塞米松組、孟魯斯特組的膠原表達量明顯增加(P<0.01)；激素治療組和孟魯斯特組的膠原表達量較哮喘組減少(P<0.01)，地塞米松組膠原表達量少于孟魯

6、斯特組(P<0.01)。 (4) 白三烯受體拮抗劑對哮喘大鼠血清白三烯水平的影響：模型組、孟魯斯特組、地塞米松組大鼠血清中LTD4均高于正常對照組(P<0.05)，但三組之間沒有顯著性差異(P>0.05)。 (5) 白三烯受體拮抗劑對哮喘大鼠肺組織α平滑肌肌動蛋白表達的影響(免疫組化法)：哮喘模型組和治療組大鼠肺組織中α-SMA的表達高于正常對照組(P<0.01)；孟魯斯特組和地塞米松組低于哮喘模型組(P<0.01)；地

7、塞米松組低于孟魯斯特組(P<0.05)。 第二部分結(jié)果： (1) 病理結(jié)果：光鏡下可見哮喘模型組大鼠氣道粘膜破壞，杯狀細胞表達增加，粘膜下大量炎癥細胞浸潤，基地膜增厚，平滑肌增殖。分析比較兩組大鼠氣道管壁面積、平滑肌面積結(jié)果顯示：哮喘模型組大鼠氣道管壁面積、平滑肌層面積均顯著大于正常對照組。 (2) 膠原表達變化(Manssion 染色)：與正常組比較，哮喘組氣道周圍和血管周圍的膠原表達量明顯增加(P<0.01)

8、。 (3) 大鼠肺組織周期蛋白D1表達變化：哮喘模型組大鼠肺組織細胞周期蛋白D1 (CyclinD1)的表達(免疫組化法和蛋白印跡法)高于正常對照組(P<0.01)。 (4) 大鼠氣道平滑肌肌動蛋白α表達變化(免疫組化法)：哮喘模型組大鼠肺組織中α-SMA增多，著色加深，表達高于正常對照組(P<0.01)： (5)對哮喘組大鼠CyclinD1 (蛋白印跡法)和α-SMA、膠原進行相關(guān)性分析結(jié)果顯示：CyclinD

9、1和α-SMA的表達變化成正相關(guān)(r=0.20，P<0.05)；CyclinD1與膠原的表達變化呈正相關(guān)(r=0.87，P<0.05)。哮喘組大鼠CyclinD1(免疫組化法)和α-SMA、膠原進行相關(guān)性分析結(jié)果顯示：CyclinD1 (免疫組化法)和α-SMA的表達變化成正相關(guān)(r=0.53，P<0.05)；CyclinD1與膠原的表達變化呈正相關(guān)(r=0.76，P<0.05)。 結(jié)論： 1.白三烯受體拮抗劑能夠明顯減