趨化因子介導內(nèi)外環(huán)境因素誘發(fā)子宮內(nèi)膜異位癥的作用機制.pdf

1、子宮內(nèi)膜異位癥(EMT)發(fā)病機制復雜。Sampson的經(jīng)血逆流學說可詮釋腹膜及部分卵巢EMT。正常情況下約有50～90％的育齡婦女發(fā)生經(jīng)血逆流入盆腔；但只有少數(shù)罹患EMT，說明EMT的發(fā)病尚受其它因素影響。逆流子宮內(nèi)膜向腹膜粘附過程中發(fā)生的事件是本研究關(guān)注的焦點。 EMT患者腹腔內(nèi)，免疫活性細胞的數(shù)量與活性均顯著高于未患EMT婦女。炎性細胞從血循進入組織通過趨化因子的濃度梯度介導，異位組織周圍炎性細胞的募集可能由種植部位的細胞合

2、成釋放特定趨化因子所介導。趨化因子生物活性的充分發(fā)揮依賴于與其受體的交聯(lián)，由于二者之間結(jié)合的復雜性，對趨化因子和受體同時進行研究將更有利于解析其在EMT中的作用地位。從分析異位灶與在位內(nèi)膜的趨化因子受體表達譜入手，篩選與EMT有關(guān)的趨化因子受體，并對它們及其相應(yīng)配體進行研究是確立趨化因子在EMT中作用地位的一個有效切入口。 異位灶局部趨化因子及其受體的轉(zhuǎn)錄和翻譯受內(nèi)分泌一免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)。EMT是一種雌激素依賴性疾病，雌激素可能是調(diào)

3、控這些趨化因子及其受體表達的因素之一。此外，人類EMT發(fā)病率升高被認為與接觸環(huán)境污染物有關(guān)。大氣污染物TCDD是全球普遍存在的最嚴重的大氣污染物，有研究發(fā)現(xiàn)與雌激素之間存在聯(lián)系。揭示二者對趨化因子及受體的調(diào)控作用，有助于闡明它們在EMT發(fā)病中的作用機制。 近年來已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種趨化因子參與EMT的發(fā)生，它們不僅擔任募集炎性細胞的功能，還有促進局部細胞增殖、參與血管形成等作用。探討相關(guān)趨化因子在異位灶形成中的作用，將為解析EMT發(fā)病機

4、制提供有價值的科學依據(jù)。 本課題擬通過以下研究設(shè)計，解析趨化因子及其受體在EMT中的表達調(diào)控及致病機制： 1．EMT患者異位灶與在位內(nèi)膜趨化因子受體表達特征 首先用RT-PCR法系統(tǒng)分析18種趨化因子受體在EMT患者在位內(nèi)膜及異位灶的轉(zhuǎn)錄水平，并篩選出異位灶較在位內(nèi)膜高轉(zhuǎn)錄的趨化因子受體(CCR5、CCR8和CXCRl)。免疫組織化學法在蛋白水平驗證上述三種趨化因子受體高表達于異位灶，同時證實在位子宮內(nèi)膜翻譯其相

5、應(yīng)配體RANTES、MIP—lα、1-309和IL-8。進一步從EMT患者在位內(nèi)膜中分離、純化子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞，RT-PCR法系統(tǒng)分析18種趨化因子受體轉(zhuǎn)錄水平，發(fā)現(xiàn)與在位內(nèi)膜轉(zhuǎn)錄模式基本吻合；流式細胞術(shù)證實了子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞表面CCR5、CCR8和CXCRl的翻譯表達。本部分研究表明：異位灶和在位內(nèi)膜表達多種趨化因子受體：與在位內(nèi)膜比較，異位灶高表達CCR5、CCR8和CXCRl。提示子宮內(nèi)膜在不同微環(huán)境中趨化因子受體表達發(fā)生改變可能

6、在腹腔內(nèi)種植中起作用。 2．CCR5／RANTES、MIP一1α在EMT中的作用 用不同濃度17p-E2和TCDD以及10-9M17β-E2聯(lián)合lnMTCDD分別處理ESC、HPMC和單核細胞系U937細胞。流式細胞術(shù)分析ESC表面CCR5表達，ELISA法檢測HPMC及U937細胞分泌相應(yīng)配體RANTES、MIP。1α水平。然后，建立異位灶相關(guān)靶細胞——ESC、HPMC和U937的細胞間非接觸和細胞間接觸共培養(yǎng)系統(tǒng)，分

7、析17B-E2和TCDD單獨或聯(lián)合處理對不同細胞共培養(yǎng)系統(tǒng)分泌趨化因子RANTES、MIP一1α的影響。 結(jié)果表明：E2和TCDD單獨處理抑制ESC表達CCR5，聯(lián)合應(yīng)用后表達上調(diào)，且與E2劑量呈正相關(guān)。17β-E2對HPMC和U937分泌RANTES無影響，但可加強TCDD對HPMC分泌RANTES的促進作用以及對U937分泌RANTES起抑制作用。HPMC和U937細胞共培養(yǎng)不僅使RANTES分泌量明顯增加；且17β-E2聯(lián)

8、合TCDD處理發(fā)揮了促進作用，這可能是腹腔液中RANTES水平增加的原因。 HPMC和U937細胞均能分泌較高水平MIP一1α。17β-E2對HPMC和U937細胞分泌MIP．1α無明顯影響；但TCDD同時促進這兩種細胞分泌MIP一1α；17B-E2和TCDD聯(lián)合應(yīng)用協(xié)同促進MIP．1α的分泌。由此可見，TCDD可能通過誘導腹腔內(nèi)MIP-1α升高參與腹腔對單核巨噬細胞募集及異位灶的形成。 2．CXCRl／IL．8在EMT

9、中的作用 結(jié)果顯示：ESC表面CXCRl表達模式與CCR5一致。TCDD促進HPMC 分泌IL-8，與17β-E2聯(lián)合后作用更加明顯。17β-E2和TCDD分別單獨處理抑制U937細胞分泌IL-8，聯(lián)合后無明顯作用。 ESC-HPMC共培養(yǎng)促進IL-8的分泌，17β-E2對共培養(yǎng)系統(tǒng)IL-8的分泌無影響；但可加強TCDD的促進作用，說明逆流子宮內(nèi)膜細胞進入腹腔引起的急性炎性反應(yīng)可被E2和TCDD擴大；HPMC-U

10、937共培養(yǎng)也對IL-8分泌起促進作用；并且較ESC-HPMC更為明顯。以上結(jié)果提示腹腔內(nèi)HPMC和周圍炎性細胞之間的間接或直接作用是IL-8的主要來源。TCDD促進HPMC-U937分泌IL-8，但與17B-E2聯(lián)合后卻明顯抑制該作用。這與炎癥反應(yīng)過程中募集不同類型的免疫活性細胞相關(guān)。 4．CCR8／I-309參與EMT的作用機制 流式細胞術(shù)分析rhI-309對子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞表面整合素p1和僅vp3的表達率和表達強度

11、的影響。趨化試驗研究rhI-309對ESC及U937細胞的趨化能力。研究結(jié)果表明：ESC表面p1表達率很高，1-309能增強其表達強度；對ανβ3無明顯影響。1-309對ESC無趨化作用，但能夠趨化、募集單核細胞。因而1-309的功能發(fā)揮具有細胞靶向性，通過上調(diào)ESC表面粘附分子的表達直接誘導其粘附，與此同時募集更多的單核細胞到達ESC種植局部，使多種趨化因子在內(nèi)的致炎因子分泌增加，引起免疫微環(huán)境改變，促進異位灶形成。 在17β

12、-E2和TCDD對異位灶相關(guān)靶細胞CCR8／I-309調(diào)控研究中發(fā)現(xiàn)：17β-E2和TCDD均能上調(diào)ESC表面CCR8表達，聯(lián)合處理無協(xié)同作用。TCDD促進U937細胞分泌1-309；在E2存在的情況下，這種作用更加明顯。HPMC與U937細胞的直接接觸能夠促進1-309的分泌，17β-E2和TCDD單獨或聯(lián)合作用對比均無明顯影響。腹腔內(nèi)巨噬細胞侵潤可能由1-309所介導。 綜上所述，本研究首先篩選出異位灶高表達的趨化因子受體C