MLK3結(jié)合蛋白對腦缺血JNK通路調(diào)控的研究.pdf

1、在大鼠和沙土鼠動物全腦缺血模型中,短暫的全腦缺血導致海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元的選擇性死亡,這種遲發(fā)的神經(jīng)元細胞丟失只有在缺血/復灌2—4天后才能觀察到。實驗證據(jù)表明,這種遲發(fā)的神經(jīng)元死亡的分子機制中存在凋亡過程。JNK蛋白激酶信號的激活是介導腦缺血應激引起神經(jīng)細胞凋亡的重要通路;最近,一種胞內(nèi)絲/蘇氨酸蛋白激酶MLK3被發(fā)現(xiàn),MLK3作為JNK級聯(lián)上游的重要活化因子,通過直接磷酸化并激活中游MKK4/7蛋白激酶,從而激活JNK應激信號通路

2、。MLK3介導了JNK誘導的神經(jīng)元凋亡和腦缺血損傷通路,并因此受到重視。然而,關于腦缺血/復灌激活MLK3的信號調(diào)控分子機制尚不清楚。
　　本文主要探討了MLK3的兩種直接結(jié)合蛋白POSH和Rac1對MLK3/JNK信號通路以及對腦缺血損傷的調(diào)控作用。POSH通過組裝POSH-MLK3/MKK4/JNKs信號模塊介導JNK通路的激活和腦缺血/復灌誘導的海馬CA1區(qū)神經(jīng)元損傷。我們首先用免疫印跡和免疫組化的方法觀察了海馬CA1區(qū)PO

3、SH蛋白在SD大鼠腦缺血/復灌后的表達分布情況。
　　結(jié)果顯示,假手術(shù)組和缺血/復灌組POSH蛋白的胞漿免疫活性在海馬CA1和CA3錐體細胞較強,然而在DG顆粒細胞表達較弱。免疫共沉淀實驗表明,POSH能與MLK3、MKK4以及p-JNKs免疫共結(jié)合,在復灌30分鐘時達最高值,在復灌1-3天時仍高于對照組。
　　同時,在腦缺血/復灌30分鐘和3天時MLK3/MKK4/JNKs信號通路存在兩個活化峰。腦室注射POSH反義寡核苷

4、酸不僅能顯著降低其蛋白表達、抑制POSH與MLK3,MKK4,和p-JNKs級聯(lián)組分的結(jié)合,還能夠抑制MLK3/MKK4/JNKs信號通路的激活。而且,腦室注射POSH反義寡核苷酸顯著增加了腦缺血/復灌5天后海馬CA1區(qū)存活神經(jīng)元的數(shù)量。
　　結(jié)果提示,POSH可能作為支架蛋白介導了腦缺血/復灌后海馬CA1區(qū)JNK信號通路的激活,POSH反義寡核菅酸通過抑制MLK3/MKK4/JNKs通路,并涉及c-Jun和Caspase-3的抑