選擇性頭部亞低溫治療新生兔缺氧缺血性腦損傷的研究.pdf

1、目的：建立一種新的新生兔缺氧缺血性腦損傷(HIBD)模型，對模型進行評價。應(yīng)用自行研制的亞低溫治療儀，先對動物頭皮溫度與腦溫之間的關(guān)系進行研究，再通過形態(tài)學(xué)檢查以及測定反映神經(jīng)系統(tǒng)損傷情況的生化指標(biāo)，探討這種新的亞低溫療法對新生動物的影響，并對亞低溫治療儀療效進行評價。應(yīng)用免疫組化方法檢測腦組織標(biāo)本中Nogo-A和GAP-43蛋白表達，初步探討亞低溫對Nogo和GAP-43蛋白表達的影響，為亞低溫的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法：

2、選擇孕期30d的孕兔，隨機分為正常對照組、缺氧5分鐘組、缺氧10分鐘組和缺氧15分鐘組。窒息相應(yīng)的時間后剖宮產(chǎn)出新生兔，觀察新生兔的皮膚、呼吸、活動能力、肌張力情況，4天后作磁共振影像(MRI)檢查，5天后采用HE染色和光鏡觀察新生兔腦組織結(jié)構(gòu)改變，并作病理評分，對模型進行評價。采用自行研制的亞低溫治療儀對所制備的缺氧缺血性新生兔進行頭部降溫，使實驗動物腦溫從36℃降至28℃，對動物頭皮溫度與腦溫進行實時監(jiān)測，研究兩者的相關(guān)性；將實驗動

3、物分為正常對照組、亞低溫干預(yù)組、室溫恢復(fù)組，通過頭顱磁共振掃描，病理切片、尼氏染色進行形態(tài)學(xué)方面的檢查，測定動物血液神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)和髓鞘堿性蛋白(MBP)含量反映腦皮質(zhì)神經(jīng)元、腦白質(zhì)損傷情況，對亞低溫治療儀的療效進行評價。亞低溫治療24小時后，應(yīng)用免疫組化方法檢測標(biāo)本中Nogo-A和GAP-43蛋白，比較各組標(biāo)本陽性細胞的個數(shù)，初步探討亞低溫對Nogo和GAP-43表達的影響。 結(jié)果：缺氧10分鐘組新生兔出生時的一

4、般情況、MRI影像學(xué)檢查符合窒息后HIBD動物的變化特點，正常對照組、缺氧5分鐘組和缺氧10分鐘組病理評分分別為(4±0，5.44±1.13，13.3±2.39)，缺氧5分鐘組與正常對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)，缺氧10分鐘組與正常對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.001)。缺氧15分鐘組新生兔生后6小時內(nèi)全部死亡，不作MRI影像學(xué)檢查及病理評分。 對頭皮溫度與顱內(nèi)溫度進行相關(guān)回歸分析，得回歸方程：Y=14.259+0.

5、589X，相關(guān)系數(shù)r=0.934，對r進行檢驗，P＜0.05，說明頭皮溫度與顱內(nèi)溫度有較強的直線正相關(guān)關(guān)系。室溫恢復(fù)組的頭顱MRI提示腦水腫、白質(zhì)與灰質(zhì)之間的界限模糊不清等影像表現(xiàn)，亞低溫干預(yù)組的影像學(xué)表現(xiàn)類似正常對照組；室溫恢復(fù)組的病理學(xué)呈現(xiàn)神經(jīng)元的變性、壞死和丟失，亞低溫干預(yù)組未見凍傷的病理表現(xiàn)，未見明顯的細胞壞死；測定血清NSE含量和MBP含量(ug/L)，室溫恢復(fù)組較正常對照組及亞低溫干預(yù)組明顯增高，差異有顯著性(P＜0.05)

6、。 生后24h各組免疫組化Nogo-A和GAP-43蛋白陽性細胞平均個數(shù)，亞低溫干預(yù)組與室溫恢復(fù)組相比差異有顯著性(P＜0.05)，而室溫恢復(fù)組又與正常對照組相比差異有顯著性(P＜0.05)。 結(jié)論：1.向孕兔輸7％二氧化碳的氮氣10分鐘使其窒息后迅速剖宮產(chǎn)取出新生兔是簡單、快速、可靠的制備HIBD模型的方法。 2.在一定的溫度范圍內(nèi)，實驗動物頭皮溫度與顱內(nèi)溫度有較強的直線正相關(guān)關(guān)系，可通過對頭皮溫度的測定，間接