內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激對T淋巴細胞功能的調(diào)節(jié)及潰瘍性結腸炎患者炎性因子表達的影響研究.pdf

1、目的：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在潰瘍性結腸炎的發(fā)病過程中發(fā)揮著重要的作用，但其發(fā)病作用機制尚不明確。本課題通過對激活的人T淋巴細胞系、小鼠淋巴結細胞及潰瘍性結腸炎患者外周血單個核細胞進行內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激（Endoplasmicreticulumstress,ER-stress）刺激，比較X-盒結合蛋白1(X-boxbindingprotein1,XBP1)剪切形式（XBP1splicing,XBP1s）及炎性細胞因子表達水平變化，探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激對T淋巴細胞

2、功能的調(diào)控作用及潰瘍性結腸炎患者對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應的變化。
　　方法：分別復蘇、培養(yǎng)Jurkat細胞及體外培養(yǎng)小鼠淋巴結細胞，將實驗分為4組：分別為空白對照組、植物血凝素（Phytohemagglutinin，PHA）或刀豆蛋白A（ConcanavalinA，ConA）刺激組、毒胡蘿卜素（Thapsigargin，TG，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+ATP酶抑制劑）刺激組、PHA/ConA和TG聯(lián)合刺激組，刺激細胞，12小時后收集細胞提取RNA，通

3、過RT-PCR檢測XBP1剪切形式，通過實時定量PCR（Q-PCR）檢測細胞因子IL-2、IFN、IL-17α表達變化。選取自2012年5月至2013年3月在中國人民解放軍第309醫(yī)院消化科就診患者，按照2007年在濟南制定的“我國對潰瘍性結腸炎診斷治療規(guī)范的共識意見”標準分組：正常對照組8例和潰瘍性結腸炎（Ulcerativecolitis，UC）患者組11例（根據(jù)潰瘍性結腸炎診斷標準，診斷為中重度者入選），抽取所有患者6-8ml外周

4、血分離提取單個核細胞，將所分離的細胞分4組，分別為空白對照組、PHA刺激組、TG刺激組、PHA和TG聯(lián)合刺激組，刺激12小時后收集細胞提取RNA，行普通PCR檢測XBP1剪切形式及實時定量PCR檢測細胞因子IL-2、IFN-γ、IL-17α的表達情況，比較各組之間差異并進行相關分析。
　　結果：1、PHA及TG聯(lián)合刺激刺激Jurkat細胞后發(fā)現(xiàn)XBP1剪切形式較單獨刺激時明顯增強；
　　2、PHA、TG聯(lián)合刺激Jurkat細

5、胞時細胞因子IL-2、IFN-γ、IL-17α表達水平較單獨刺激時明顯升高，有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；
　　3、與ConA、TG單獨刺激小鼠淋巴結細胞相比二者聯(lián)合刺激時XBP1剪切形式明顯增強；
　　4、與ConA、TG單獨刺激小鼠淋巴結細胞相比二者聯(lián)合刺激時細胞因子IL-2、IFN-γ、IL-17α表達水平明顯升高，有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；
　　5、用PHA及TG單獨及聯(lián)合刺激正常人及潰瘍性結腸炎患者外周血

6、單個核細胞后XBP1均發(fā)生剪切，且聯(lián)合刺激時剪切形式較明顯；但與正常人相比，潰結患者的外周血單個核細胞發(fā)生剪切更明顯；
　　6、分別用PHA與TG單獨、聯(lián)合刺激正常人及潰瘍性結腸炎患者外周血單個核細胞，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合刺激組IL-2、IFN-γ、IL-17α表達水平均增高，但潰結患者炎性細胞因子的表達量較正常人明顯升高。
　　結論：1、在T細胞激活狀態(tài)下，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激可增加XBP1的剪切反應，增強炎性細胞因子的表達；
　　2、在