MADD在非小細胞肺癌組織中的表達及其對A549細胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、肺癌是我國最常見的呼吸道惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率均占惡性腫瘤的首位。在肺癌患者中，約30％的非小細胞肺癌可以行手術切除治療，但術后5年存活率不足10％，生活質量也不高，而晚期不能手術的患者只能采用常規(guī)化療或放療，其不但毒副作用大，療效也不理想。因此，尋找新的有效的治療手段對非小細胞肺癌的治療具有很重要的現實意義。
　　 腫瘤壞死因子相關死亡配體（TRAIL）是腫瘤壞死因子家族成員，研究發(fā)現其在體內外均表現出良好的抗腫瘤效果，且

2、對正常組織細胞幾乎無任何影響。目前，對TRAIL信號途徑的關注主要集中在腫瘤治療上，已有多種針對TRAIL信號途徑的重組TRAIL蛋白制劑、死亡受體抗體等藥物進入Ⅱ期臨床試驗階段，并取得了不錯的效果。TRAIL聯合其它抗腫瘤治療方法亦在增強癌細胞藥物敏感性、抑制癌細胞的生長和轉移中表現出很好的效果。但多種腫瘤對TRAIL有固有性或獲得性耐受，限制了其在腫瘤治療中的應用。有絲分裂原激酶活化死亡結構域蛋白(MADD)是IG20基因編碼的6種

3、蛋白亞型之一，研究證明其在多種腫瘤細胞中過表達，與腫瘤細胞的TRAIL耐受性有關，因此MADD被認為是逆轉腫瘤細胞TRAIL耐受的潛在的分子靶點。截至目前，關于MADD在正常肺組織與肺癌組織中表達差異及其作用的研究還未見報道，因此本研究觀察了MADD在非小細胞肺癌組織中的表達，并探討了MADD對肺腺癌細胞增殖和凋亡的影響。
　　 實驗方法:
　　 1.免疫組化法檢測正常肺組織與肺癌組織中MADD的表達;
　　 2

4、.逆轉錄PCR檢測肺腺癌細胞A549中IG20基因的表達;
　　 3.質粒擴增;
　　 4.慢病毒包裝、滴度測定及病毒顆粒擴增;
　　 5.Lipofectamine2000脂質體法或慢病毒載體感染法將外源質?；蚵《据d體導入A549細胞;
　　 6.Westernblot法檢測A549細胞處理前后MADD表達水平變化;
　　 7.MTT實驗檢測A549細胞處理前后細胞增殖狀況變化;
　　

5、 8.AnnexinV/FITC雙染實驗檢測A549細胞轉染質?；蚋腥韭《据d體后細胞凋亡水平。
　　 實驗結果:
　　 1.正常肺組織、肺鱗癌及腺癌組織細胞胞漿內均有MADD表達，表達水平的高低依次為肺腺癌組織、肺鱗癌組織、正常肺組織;
　　 2.肺腺癌A549細胞中可表達IG20的四種蛋白異型體，其分別為IG20、MADD、IG20-SV2和DENN-SV;
　　 3.獲得足量的高純度轉染用質粒;

6、r>　　 4.慢病毒有效包裝及擴增;
　　 5.質粒和慢病毒載體可被有效轉入A549細胞;
　　 6.A549細胞內MADD表達顯著增高或受抑制;
　　 7.MADD高表達可促進A549細胞增殖，低表達可抑制A549細胞增殖;
　　 8.MADD高表達可抑制A549細胞凋亡，低表達可促進A549細胞凋亡。
　　 結論:
　　 本研究發(fā)現較肺正常組織，MADD在非小細胞肺癌組織中過表達。M