離體人真皮成纖維細胞熱損傷變性后轉歸及HSP90的保護作用.pdf

1、目的：探討體外培養(yǎng)的成纖維細胞(Fibroblast FB)熱損傷變性后形態(tài)，功能的變化規(guī)律及HSP90的表達。 方法：采用體外組織細胞培養(yǎng)技術培養(yǎng)離體人真皮成纖維細胞，選擇52℃浴水加熱30S作為實驗組，37℃30S為對照組，于3h，6h，12h,24h,36h,48h,72h,96h，120h,168h，240h等不同時相點分別采用MTT法，倒置顯微鏡，透射電鏡，流式細胞儀，反向高效液相儀，乳酸脫氫酶(Lactic Acid

2、 Dehydrogenase，LDH)試劑盒，Na+-K+-ATP酶試劑盒， I型膠原和堿性成纖維細胞生長因子(FGF2)ELASA Kit,RT-PCR，免疫熒光及Western blot等技術對上述兩組細胞的存活，形態(tài)，細胞膜通透性，Na+-K+-ATP酶，FGF2的分泌，I型膠原的轉錄，分泌及HSP90的合成等進行檢測。 結果：實驗組成纖維細胞生存率為50％，顯著低于對照組(P<0.05)，電鏡顯示實驗組細胞3h細胞膜，線

3、粒體，內質網有明顯損傷，透明樣物，髓鞘樣物增多，24h達到頂峰，細胞核形態(tài)始終未見明顯異常，72h(3天)后成纖維細胞開始逐漸恢復，168h(7天)細胞形態(tài)基本恢復正常。流式細胞儀提示細胞滯留S期(S為21.13％)，明顯高于對照組(S為14.29％，P<0.01)；實驗組細胞凋亡率(3.59％)也明顯高于對照組(0.12％)(P<0.01)。實驗組細胞3h細胞膜LDH漏出率為1057.90±243.61U/L，顯著高于對照組646.0

4、8±248.98 U/L(P<0.05)，24hLDH漏出率達到高峰(實驗組：1493.88±80.723 U/L，對照組：62150+_228.82 U/L，P<0.01)，72h后基本恢復正常。實驗組胞膜中3h Nal+-K+-ATP酶的活性為1.40 ±0.04U/L，低于對照組1.49±0.04U/L(P<0.05，為正常活性的95.3‰)，24h實驗組Na+-K+-ATP酶的活性為0.30±0.02 U/L，低于對照組0.49

5、-20.06 U/L(P<0.05，為正常活性的61.2‰)，48h后基本恢復正常。實驗組3h細胞線粒體ATP量為345439.4_±33954.24μg/ml，低于對照組435416.4±23613.2μg/ml(實驗組ATP量為對照組的79‰，P<0.05)，24h實驗組細胞線粒體ATP量進一步降低為94731.00_±1082.12μg/ml，明顯低于對照組215604.2±20610.17μg/ml(實驗組ATP量為對照組的43

6、.94‰，P<0.05)。實驗組24h，168h，240h的細胞外FGF2量與對照組無差異(P>0.05)，48h，72h，96 h，120 h比對照組低(P<0.05)且它們之間相對穩(wěn)定(P>0.05).24h，72h，120 h，168h，240h實驗組細胞I型膠原的轉錄，分泌與對照組無差別(P>0.05)。用免疫熒光觀察到FB熱損傷后24h胞漿，胞核中HSP90高表達。Western blot顯示3h即有HSP90表達量升高，24