奈韋拉平對甲狀腺未分化癌細胞增殖分化及碘攝取能力的影響.pdf

1、目的：
　　由于甲狀腺未分化癌細胞的惡性程度高、細胞增殖快,甲狀腺未分化癌確診時往往已經(jīng)發(fā)生轉移,手術、放療及化療等常規(guī)治療方法效果多不理想。高分化的甲狀腺癌攝碘能力尚可,所以,可以用放射性碘治療殺死原發(fā)或轉移部位的腫瘤,但對于甲狀腺未分化癌來說卻不能用放射性碘治療,因為,甲狀腺未分化癌細胞內鈉/碘同向轉運體(NIS)、甲狀腺過氧化物酶(TPO)、甲狀腺球蛋白(TG)、促甲狀腺激素受體(TSHR)等甲狀腺特異性基因的表達減少甚至缺

2、失,尤其是NIS表達減少,導致甲狀腺未分化癌細胞無法攝取放射性碘,使其不適于放射性碘治療,其治療十分棘手。
　　內源性逆轉錄酶(RT)基因在體內主要由逆轉錄轉座子及內源性逆轉錄病毒兩種重復序列編碼,參與各種病理生理過程。在高分化組織中,逆轉錄酶的表達量較低,而在細菌細胞、胚胎組織、未分化及變異細胞中其表達量較高,這暗示逆轉錄酶與細胞潛在的增殖分化能力可能存在著直接的聯(lián)系。逆轉錄酶抑制劑對體內逆轉錄酶的活性具有抑制作用,并可以抑制細

3、胞增殖,誘導分化。
　　基于以上理論,本研究旨在通過奈韋拉平(一種非核苷類逆轉錄酶抑制劑)誘導甲狀腺未分化癌FRO細胞,觀察其對FRO細胞增殖及細胞內NIS等甲狀腺特異性基因表達的影響,并進行細胞攝碘能力的測定,比較藥物誘導前后碘攝取的變化,探討奈韋拉平能否抑制甲狀腺未分化癌細胞增殖、誘導分化及誘導細胞攝取放射性碘,試圖尋找一種能使甲狀腺未分化癌細胞攝取碘的藥物,以便用碘治療殺滅甲狀腺未分化癌細胞。
　　方法：
　　1

4、.細胞增殖抑制率檢測實驗:MTT法檢測不同濃度奈韋拉平(O,100,200,350,500umol/L)對FRO細胞的增殖抑制作用;
　　2.細胞計數(shù)檢測奈韋拉平對細胞增殖抑制的可逆性;
　　3.Hoechst33258染色檢測不同濃度奈韋拉平(O,200,350,500umol/L)誘導后FRO細胞的凋亡情況,臺盼藍染色檢測奈韋拉平(O,200,350,500umol/L)對FRO細胞的毒性作用;
　　4.倒置相差顯

5、微鏡照相觀察奈韋拉平誘導后FRO細胞表型變化;
　　5.real.time PCR檢測奈韋拉平誘導后FRO細胞和甲狀腺乳頭狀癌BHP細胞中NISmRNA和TSHRmRNA的表達:
　　6.普通RT-PCR和real.time PCR檢測加入TSH后FRO細胞中NISmRNA的表達:
　　7.放射性碘攝取實驗觀察奈韋拉平誘導前后FRO細胞攝碘的變化。
　　結果：
　　1.不同濃度奈韋拉平作用后,FRO細胞增殖

6、受到抑制,抑制作用隨著藥物濃度增大而增強,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);
　　2.奈韋拉平所誘導的FRO細胞增殖抑制具有可逆性;
　　3.在350mmol/L濃度范圍內奈韋拉平?jīng)]有引起明顯的細胞凋亡,對細胞沒有產生明顯的毒性作用,大于該濃度時毒性作用增加;
　　4.奈韋拉平誘導后FRO細胞表型向分化型細胞表型發(fā)展;
　　5.奈韋拉平誘導后FRO細胞中NISmRNA和TSHRmRNA的表達較對照組增加,差異有統(tǒng)

7、計學意義(P＜0.01和P＜0.05);奈韋拉平誘導后BHP細胞中NISmRNA和TSHRmRNA的表達較對照組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P＞O.05);
　　6.奈韋拉平預處理過的FRO細胞,在加入TSH后細胞中NISmRNA的表達進一步增加,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);
　　7.奈韋拉平誘導前后FRO細胞放射性計數(shù)分別為【(5.34±0.93)X103計數(shù)·min-1/106個細胞】和【(6.76±0.60)X103

8、計數(shù)·min-1/106個細胞】,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　結論：
　　奈韋拉平能夠抑制FRO細胞增殖,且這種對增殖的抑制作用是可逆的,同時能夠誘導FRO細胞表型向分化型細胞發(fā)展,并誘導FRO細胞中NISmRNA和TStHRmRNA表達增加,表明奈韋拉平能夠誘導甲狀腺未分化癌細胞分化;用奈韋拉平預處理過的FRO細胞,在TSH刺激下NISmRNA的表達進一步增加,表明奈韋拉平對FRO細胞中TsH/SHR途徑有修復